Таблица 6 Содержание мелатонина и серотонина в клетках предстательной железы в норме, при доброкачественной гиперплазии и аденокарциноме

Из данных, представленных в табл. 6, следует, что в интактной предстательной железе накопление МТ было в пределах нормы чаще, чем в ткани аденокарциномы. При этом не наблюдались различия в накоплении МТ в аденокарциноме и в интактной железе в 33% образцов, а в 59% образцов накопление МТ в аденокарциноме была выше, чем в интактной железе. Разница в содержании МТ в аденокарциноме по сравнению с интактной железой (табл. 6) была статистически достоверна.

Данные показывают, что у примерно 60% лиц, страдающих аденокарциномой предстательной железы, содержание МТ и серотонина в клетках железы повышено, что может быть использовано для диагностики названного заболевания.

Мелатонин-содержащие клетки в неэндокринных злокачественных опухолях у пациентов пожилого и старческого возраста
Мелатонин-содержащие клетки в опухолях гортани

При окраске гематоксилином-эозином опухоли гортани во всех случаях имели строение плоскоклеточного рака. Из 32 исследованных новообразований 13 опухолей представляли собой плоскоклеточный неороговевающий рак, 19 – плоскоклеточный ороговевающий рак. В 9 из 32 исследованных опухолей были обнаружены апудоциты: в 4 плоскоклеточных ороговевающих раках и в 5 плоскоклеточных неороговевающих раках.

Обработка препаратов по Гримелиусу показала, что во всех 9 случаях апудоциты в ткани опухоли давали положительную аргирофильную реакцию, в то время как при окраске опухолей по методу Массона только в 3 случаях их
9 выявлялись клетки, окрашивающиеся в коричневый цвет. И аргирофильные,
и аргентаффинные клетки располагались, как правило, группами по 3-5 клеток.

В некоторых наблюдениях встречался рассыпной тип расположения: по одной клетке в различных участках опухоли, преимущественно вокруг крупного сосуда. Среднее количество аргирофильных клеток составляло 30,41 ±0.04 на 1 мм² .

При окрашивании по методу Севки в 4 опухолях из 9 были обнаружены клетки, окрашивающиеся в оранжевый цвет. Локализация, форма и размеры этих и аргентаффинных клеток в ряде наблюдений совпадали.

Следует отметить, что общее количество этих клеток было значительно больше, чем клеток, вступающих в положительную иммуногистохимическую реакцию с антителами против серотонина и МТ.

При обработке препаратов антителами к серотонину, N-ацетилсеротонину, 5-метокситриптамину (мексамину) и МТ были зарегистрированы следующие ре­зультаты: в 3 наблюдениях аргентаффинные клетки вступали в положительную иммуногистохимическую реакцию с антисывороткой к серотонину; клетки, даю­щие положительную реакцию с антисывороткой к МТ, были выявлены в 2 наблюдениях, они также вступали в положительную реакцию с антисыворотками против N-ацетилсеротонина или мексамина.

При сопоставлении гистологического типа и гистохимического профиля опухолей было отмечено, что все 3 опухоли, в которых были обнаружены аргентаффинные клетки, представляли собой плоскоклеточный ороговевающий рак.

Светооптическое исследование препаратов опухолей легких, окрашенных гематоксилином-эозином, показало, что все 23 исследуемые опухоли относились к раковым новообразованиям и распределялись следующим образом: 11 – плоскоклеточные раки без ороговения, 8 – плоскоклеточные раки с ороговением, 4 – аденокарциномы.

Плоскоклеточные раки были построены из комплексов эпителиальных клеток, содержащих округлое или полиморфное ядро, в котором часто наблюдались атипичные фигуры митозов. В центре комплексов встречались роговые массы, иногда формирующие концентрические слоистые образования – так называемые «раковые жемчужины».

Аденокарциномы имели характерное для данного типа опухолей строение. В плоскоклеточных неороговевающих раках довольно часто обнаруживались опухолевые клетки в лимфатических щелях, что свидетельствовало о возможности более быстрого метастазирования этого типа опухолей по сравнению с плоскоклеточными раками с ороговением.

В 9 из 23 исследованных новообразований были обнаружены апудоциты. Положительная аргирофильная реакция была зарегистрирована во всех
9 наблюдениях, в то время как аргентаффинная только в 5 из 9 случаев. Среднее количество аргирофильных клеток в раковых опухолях легких составляло 40,32±0,36 на 1 мм² .

При окраске по методу Севки в 2 аденокарциномах и в

Для идентификации типа продуцируемых веществ был использован иммуногистохимический метод, в результате чего в 7 из 9 раковых опухолей, содержащих апудоциты, были обнаружены клетки, в которых присутствовал серотонин. В то время как МТ был идентифицирован только в более дифференцированных опухолях – 2 аденокарциномах и 1 плоскоклеточном раке с ороговением.

Таким образом, было установлено, что в ткани аденокарциномы легкого есть апудоциты, содержащие серотонин и МТ. В плоскоклеточном раке
с ороговением встречаются также серотонин- и МТ-содержащие клетки, в то время как в плоскоклеточной раковой опухоли без ороговения они отсутствуют. Следует обратить внимание, что клетки, иммунореактивные к серотонину и МТ, дают также положительную реакцию с антисыворотками против предшественников этих веществ – мексамина и N-ацетилсеротонина, что свидетельствует о продукции серотонина и МТ в апудоцитах, присутствующих в составе неэндокринных злокачественных опухолей.
Мелатонин-содержащие клетки в опухолях желудка

При гистологическом исследовании 44 раковых опухолей желудка, из которых 23 составляли аденокарциномы, 9 – скирр и 12 – солидные раки; апудоциты встречались в 12 опухолях. Все они давали положительную аргирофильную реакцию. Среднее количество этих клеток составляло 51,7±0,24 на 1 мм². Опухоли имели гистологическое строение, типичное для каждой вышеуказанной формы.

В аденокарциномах иногда встречались очаги ослизнения, в некоторых участках довольно массивные. В скиррозных опухолях в той или иной степени были выражены соединительнотканные прослойки, в солидных раках встречались тяжи, построенные из опухолевых клеток с многочисленными митозами.

В 9 из 13 опухолей желудка, содержащих эндокринные клетки, были обнаружены серотонинпродуцирующие апудоциты; они встречались в аденокарциномах (6 наблюдений), солидных раках (2 наблюдения), скиррозном раке (1 наблюдение). При окраске гематоксилином-эозином они были крупнее обычных клеток, располагались в базальной части атипичных желез или инфильтрировали подлежащие ткани. Цитоплазма их эозинофильна, ядро смещено в апикальный полюс. При окраске по методу Масона во всех 9 случаях эти клетки вступали в положительную реакцию, окрашиваясь в различные оттенки коричневого цвета.

При использовании антител к серотонину в 9 наблюдениях эндокринные клетки вступали с ними в положительную реакцию, причем количество иммунореактивных клеток было больше в высокодифференцированных опухолях (аденокарциномах). В менее дифференцированном раке (скирр,
1 наблюдение) встречались единичные серотонин-продуцирующие клетки, которые располагались, в основном, вблизи сосудов.

При иммуногистохимическом исследовании раковых опухолей желудка

Из 30 изученных опухолей толстой кишки 17 располагались в поперечно-ободочной кишке, 6 – в восходящем отделе и 7 – в нисходящем отделе толстой кишки. При гистологическом исследовании 24 опухоли представляли собой аденокарциномы, 6 – солидные раки. Из 24 аденокарцином 19 опухолей были высокодифференцированными и содержали железы различных величин и форм. В некоторых клетках встречались атипичные фигуры митозов. Гистологическая картина солидного рака была обычной для этого вида опухолей. Из 30 случаев в 10 (в 9 аденокарциномах и

При иммуногистохимическом исследовании аденокарцином толстой кишки в 5 наблюдениях были обнаружены серотонин-продуцирующие клетки. Во всех 6 опухолях, содержащих вышеописанные иммунореактивные клетки, были обнаружены аргирофильные клетки, количество и локализация которых совпадали с числом и расположением клеток, вступающих в положительные реакции с антителами к серотонину и МТ.

Из 53 изученных раковых опухолей прямой кишки 41 составляли аденокарциномы и 12 – солидный рак. 34 аденокарциномы были построены из желез, выстланных базофильными, не содержащими слизи клетками, расположенными в один или несколько слоев, либо, наоборот, слизеобразующим эпителием. В 7 наблюдениях обнаружился низкодифференцированный железистый (слизистый или коллоидный) рак. В этих опухолях железы редки, в основном клетки располагаются поодиночке или группами в слизистых массах, расслаивающих строму, а иногда формирующих неправильной формы полости. Встречаются также солидно-криброзные структуры и тяжи, в которых железистый просвет выявляется нечасто. В 12 случаях наблюдались солидные раки, клетки которых формировали тесно прилегающие друг к другу тяжи, разделенные тонкими прослойками соединительной ткани. В 19 из 53 изученных злокачественных новообразований были обнаружены апудоциты, дающие положительную аргирофильную реакцию. Они встретились в 13 аденокарциномах и в 6 солидных раках. Среднее количество аргирофильных клеток составляло 5,46±0,18 на 1 мм². В 16 наблюдениях были идентифицированы аргентаффинные клетки (в 12 аденокарциномах и 4 солидных раках).

В 8 наблюдениях аденокарцином из 13 при окраске по методу Севки были обнаружены клетки, окрашивающиеся в оранжевый цвет, характерный для серотонина. Они в подавляющем большинстве наблюдений локализуются в тех же зо­нах, что и аргентаффинные клетки. Положительный результат обеих реакций дал основание предположить, что эти клетки, содержащие серотонин, могут быть ответственны за выработку индолилалкиламинов. Для выяснения этого во­проса было предпринято иммуногистохимическое исследование с применением антител к серотонину, МТ и их аналогам. При этом было верифицировано присутствие серотонина в 13 наблюдениях аденокарциномы, в 9 случаях описанные клетки, кроме серотонина, содержали также МТ.

Иммуногистохимическое исследование солидных раков показало, что эти аргентаффинные клетки только в 1 случае вступали в реакцию с антителами к серотонину, в то время как с другими антителами реакции были отрицательны. В 2 из 4 наблюдений, в которых были обнаружены аргентаффинные клетки, они окрашивались по методу Севки в оранжевый цвет, что подтверждало наличие в них серотонина.
Ультраструктурная верификация гормональной функции

неэндокринных опухолей у пациентов пожилого и старческого возраста

Электронно-микроскопическому исследованию было подвергнуто

В ткани плоскоклеточного неороговевающего рака гортани среди опухолевых эпителиальных клеток, содержащих большое количество беспорядочно располагающихся тонофибрилл и кератогиалина, встречались клетки, богатые митохондриями, рибосомами с хорошо развитым пластинчатым комплексом и элементами ШЭР и ГЭР. В этих клетках обнаруживались полиморфные секреторные гранулы различной величины, некоторые гомогенные, некоторые же с электронноплотной сердцевиной и узким светлым ореолом вокруг нее.

В ткани плоскоклеточного ороговевающего рака легкого среди опухолевых эпителиальных клеток были обнаружены клетки с округлыми или неправильной формы ядрами, в цитоплазме которых, кроме различных органелл, идентифицировались секреторные гранулы различной формы и размеров (округлые, вытянутые, гантелеобразные) с осмиофильной электронноплотной сердцевиной и узким светлым ореолом вокруг нее или гомогенноплотные.

В ткани аденокарциномы легкого, состоящей из различных опухолевых клеток с электронно-микроскопическими признаками пневмоцитов II порядка, недифференцированных клеток, клеток типа слизистых, встречались эндокринные клетки с множеством разнообразных секреторных гранул, выраженными профилями ШЭР, ГЭР, большим количеством митохондрий и рибосом.

В ткани аденокарцином желудка при электронно-микроскопическом исследовании обнаруживались как недифференцированные опухолевые клетки, так и раковые клетки с признаками дифференцировки, среди которых были выявлены клетки с эндокринной дифференцировкой, содержащие сравнительно большое количество секреторных гранул, часть из которых имела стертую сероватую облаковидную сердцевину, а часть – эксцентрично расположенную электронно-плотную сердцевину.

В ткани аденокарцином толстой и прямой кишки среди опухолевых клеток различной степени дифференцировки встречались эндокринные клетки

МТ – один из гормонов APUD-системы, в течение многих лет рассматри­вался только как гормон пинеальной железы. Как только стало доступным ис­пользование высокочувствительных антител к индолилалкиламинам, оказалось возможным идентифицировать МТ не только в пинеальной железе, но также и в экстрапинеальных тканях – сетчатке, Гардериановой железе, мозжечке, слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей, в печени, почках, надпочечниках, тимусе, щитовидной железе, поджелудочной железе, яичниках, каротидном теле, плаценте, эндометрии, а также и в неэндокринных клетках, та­ких как тучные клетки, естественные киллеры, эозинофильные лейкоциты, тром­боциты и клетки эндотелия. Функционально МТ-позитивные клетки являются неотъемлемой частью APUD-серии и звеном диффузной нейроэндокринной системы как универсальной системы адаптации, контроля и защиты организма. Принимая во внимание большое количество МТ-позитивных апудоцитов во многих органах, широкий спектр биологической активности МТ и особенно его геропротекторные свойства, о чем свидетельствуют данные диссертационного исследования, представляется возможным рассматривать экстрапинеальный МТ в качестве сигнальной молекулы для локальной координации клеточных функций в норме, при различной патологии и старении организма.

При старении происходит замещение атрофированной паренхимы пинеальной железы соединительной тканью, отмечается относительная стабильность массы железы у людей в возрасте до 75-80 лет и уменьшение ее после 80 лет. Прогрессивно снижается общее количество пинеалоцитов, иммунопозитивных к мелатонину, и их оптическая плотность, но сохраняется часть гормонально активной паренхимы данного органа.

1. 
   При возрастном прогрессирующем снижении количества мелатонина в пинеалоцитах, количество мелатонин-иммунопозитивных ЕС-клеток в слизистой оболочке желудка сохраняется стабильным до 60 лет и снижается у людей в возрасте 61-85 лет, но оптическая плотность мелатонин-иммунопозитивных энтерохромаффинных клеток остается при этом стабильной, что свидетельствует о снижении содержания мелатонина в общем пуле клеток слизистой оболочки желудка у людей старше 60 лет за счет численного уменьшения популяции энтерохромаффинных клеток, а не за счет снижения его содержания в самих энтерохромаффинных клетках.
   
2. 
   Снижение количества мелатонин-содержащих клеток и мелатонина в них в бронхиальном эпителии происходит у лиц старше 70 лет. Площадь мелатонин-содержащих клеток ацинусов и протоков поджелудочной железы в возрасте 50 лет снижается вдвое. В надпочечниках изменения количества мелатонин-иммунопозитивных клеток с возрастом не выявлено.
   
3. 
   В ткани предстательной железы обнаружено большое количество мелатонин-иммунопозитивных клеток, площадь и оптическая плотность которых снижаются с увеличением возраста, что ассоциируется с развитием в данном органе гиперпластических процессов, характерных для старения.
   
4. 
   При иммуногистохимическом исследовании плацент родильниц разного возраста мелатонин-содержащие клетки выявлены во всех структурных элементах ворсинчатого хориона: синцитиотрофобласте, синцитиокапиллярных мембранах, синцитиальных почках и узлах, единичных клетках стромы и эндотелии сосудов. Содержание мелатонина в этих клетках снижается с увеличением возраста родильниц (начиная с 28 лет).
   
5. 
   В иммунокомпетентных клетках (тучных клетках и естественных киллерах) зарегистрировано высокое содержание мелатонина, количество которого при старении снижается.
   
6. 
   При радиационном моделировании старения наблюдается выраженная гипоплазия мелатонин-иммунореактивных клеток в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки, примерно в 10 раз снижается количество тучных клеток. При пинеалэктомии и у нокаутных долгоживущих мышей количество мелатонин-иммунопозитивных энтерохромаффинных клеток возрастает.
   
7. 
   В слизистой оболочке желудка больных хроническим гастритом обнаружено увеличение количества мелатонин-содержащих энтерохромаффинных клеток. При обострении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки отмечена выраженная гиперплазия мелатонин-содержащих клеток слизистой оболочки и активизация их цитоплазматических органелл.
   
8. 
   В слизистой оболочке толстой кишки при неопухолевых заболеваниях (хронические колиты, болезнь Крона) у людей обнаружена гиперплазия мелатониниммунореактивных клеток, тогда как при раке их количество резко снижается.
   
9. 
   При аденокарциноме предстательной железы обширные и множественные скопления мелатонин-содержащих клеток обнаружены в высокодифференцированных опухолях. При доброкачественной гиперплазии эти клетки располагаются в виде небольших незрелых гиперпластических узелков. Снижение содержания мелатонина в клетках предстательной железы сочетается с развитием в ней гиперпластических процессов, ассоциированных со старением.
   
10. 
    В злокачественных эпителиальных (раковых) опухолях гортани, легких, желудка и толстой кишки обнаружены апудоциты, содержащие мелатонин. Количество мелатонин-содержащих клеток в пргрессирующих опухолях снижается, достигая минимальных значений при распространенных метастазах, что имеет важное прогностическое значение.
    
11. 
    Комплекс проведенных исследований демонстрирует ассоциацию изменений количества эктрапинеальных мелатонин-содержащих клеток и уровня содержания в них мелатонина с интенсивностью прогрессии опухолей и хронических воспалительных заболеваний у людей пожилого и старческого возраста, что позволяет сформулировать концепцию, согласно которой: динамика развития морфо-функциональных изменений эктрапинеальных мелатонин-содержащих клеток отражает степень интенсивности процесса старения и развития заболеваний, ассоциированных с возрастом, и является важным звеном патогенеза соматических заболеваний у пожилых и старых людей.
    

1. 
   Нарушение количества мелатонин-иммунопозитивных клеток и содержания в них мелатонина в предстательной железе следует рассматривать как признак интенсивного развития в ней гиперпластических процессов, ассоциированных со старением.
   
2. 
   При выработке прогноза и выборе терапии, оптимизирующей нарушенные процессы нейроиммуноэндокринного взаимодействия при старении, рекомендуется определять в биоптатах количество мелатонин-содержащих клеток.
   
3. 
   В слизистой оболочке толстой кишки гиперплазию мелатонин-иммунореактивных клеток следует рассматривать как признак развития неопухолевых заболеваний (хронические колиты, болезнь Крона), тогда как резкое снижение этого показателя указывает на наличие злокачественных опухолей.
   
4. 
   Снижение количества мелатонина в неэндокринной злокачественной опухоли является признаком ее прогрессии, а минимальные значения этого параметра могут рассматриваться как маркер наличия распространенных метастазов.
   
5. 
   Обнаружение выраженных геропротекторных свойств мелатонина позволяет рекомендовать разработку лекарственных препаратов на его основе для профилактики и лечения нарушений нейроиммуноэндокринной регуляции функций у людей пожилого и старческого возраста.
   

1. 
   Аничков Н.М. Хронический простатит: 1) этиология, патогенез, моделирование, классификации /Н.М. Аничков, И.В. Князькин // Успехи геронтологии.- 2003. – Вып. 11. - С. 84–92.
   
2. 
   Биогеронтологические аспекты исследования нейроэндокринных клеток в культуре ткани / Н.И. Чалисова, В.О. Полякова, И.В. Князькин, С.С. Коновалов, И.М. Кветной // Успехи геронтологии. – 2005. – Вып. 17. – С. 42–49.
   
3. 
   Значение мелатонина в диагностике некоторых заболеваний внутренних органов и перспективы его применения в практической медицине / К.И. Прощаев, А.Н. Ильницкий, Т.В. Кветная, И.В. Князькин, Е.С. Голубицкая, А.В. Антропов, О.Е. Антропова // Мед. акад. ж. – 2007. – Т. 7, № 2. – С. 95–105.
   
4. 
   Князькин И.В. Мелатонин, старение и опухоли предстательной железы / И.В. Князькин // Успехи геронтологии. – 2008. – Вып. 21. – С. 87-91.
   
5. 
   Князькин И.В. Пинеальная железа и экстрапинеальные источники мелатонина в висцеральных органах при естественном старении человека / И.В. Князькин // Успехи геронтологии. – 2008. – Вып. 21. – С. 94-95.
   
6. 
   Князькин И.В. Хронический простатит: 2) клиническое течение, диагностика, современные методы лечения / И.В. Князькин, Н.М. Аничков // Успехи геронтологии. – 2003. – Вып. 11. – С. 93–103.
   
7. 
   Князькин И.В. Экстрапинеальный мелатонин в процессах ускоренного и преждевременного старения у крыс / И.В. Князькин // Успехи геронтологии. – 2008. – Вып. 21. – С. 92-93.
   
8. 
   Эффекты действия мелатонина на старение клеток тимуса и периферические Т-лимфоциты in vitro / В.О. Полякова, И.В. Князькин, С.С. Коновалов, И.М. Кветной, А.В. Трофимов, Е.Н. Чернышова, А.Ю. Чебракова // Успехи геронтологии. – 2005. – Вып. 17.-С.10–14.