Методические рекомендации по лабораторной диагностике легионеллеза (болезни легионеров) Методические рекомендации подготовлены сотрудниками Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи амн СССР

бронхоскопии, плевральную жидкость, легочный экссудат. Описаны единичные случаи выделения

возбудителя из мокроты, крови. Значительно чаще выделяют возбудитель из секционного материала

(легочной ткани). При бактериологическом исследовании на легионеллез применяют посев на

специальные питательные среды и биологическую пробу на чувствительных животных.
1. Посев на питательные среды
Возбудитель легионеллеза не растет на обычных питательных средах, в том числе очень богатых

(мясо-пептонный агар, агар Хоттингера, триптически-соевый агар, среды на сердечно-мозговом

экстракте и др.).
На шоколадном и кровяном агаре возможен слабый рост микроба в первой генерации при

массовых посевах культуры.

применяемых для культивирования легионелл с обязательным добавлением L-цистеина и

растворимого пирофосфата железа. Наибольшее распространение получила угольно-дрожжевая

среда. Хорошие результаты получены при замене дрожжевого экстракта на сернокислый гидролизат

предотвращения пророста посторонней микрофлоры при исследовании контаминированного

материала к среде добавляют антибиотики (полимиксин В 40 ед./мл + пенициллин 0,5 мкг/мл +

амфотерицин Б 80 мкг/мл).

Высевают разведенный и цельный образец в количестве 0,2 мл. При исследовании секционного

материала кусочек ткани массой 1 г растирают в стерильной ступке пестиком и готовят 10-

процентную суспензию ткани в фосфатном буфере (pH - 7,2). Приготовленную суспензию разводят

1:50 тем же буфером и высевают на среды.
Рост колоний из клинического материала наблюдается не ранее чем через 4 - 5 суток.

Максимальное количество видимых колоний обычно вырастает на 8 - 10 сутки. При подозрении на

рост легионелл колонии пересевают на ту же среду и на среду, не поддерживающую рост легионелл

(контрольную среду). В качестве контрольной среды обычно используют агар Хоттингера или

триптический соевый агар. Рост колоний во втором пассаже на угольно-дрожжевой или рыбно-

костной среде при отсутствии роста на контрольной среде с большой долей вероятности позволяет

заподозрить легионеллез и указывает на необходимость дальнейшей идентификации.
С целью получения чистой культуры возбудителя легионеллеза от биопробных морских свинок

рекомендуется производить посев селезенки биопробного животного одновременно на 3 чашки со

следующими средами:
1. Угольно-дрожжевой агар.
2. Угольно-дрожжевой агар с антибиотиками.
3. Агар Хоттингера.
Угольно-дрожжевая среда может быть заменена на рыбно-костную среду. При гибели

животного от легионеллеза посев должен быть положительным на первых двух чашках. При гибели

от другой инфекции рост возбудителя будет отмечаться на 1-ой и 3-ей чашке и отсутствовать во 2-ой.
    Угольно-дрожжевая  среда:  дрожжевой  экстракт  -  10 г,

активированный

0,25 г,
K HPO  - 0,85 г, K H PO  - 1,0 г, агар - 17 г, дист. H O - 980 мл.

воды, растворяют, доводят до кипения и автоклавируют 15 минут при температуре 121 °С. Среду

охлаждают до 50 °С и добавляют свежеприготовленные растворы L-цистеина (0,4 г в 10 мл дист.

воды) и пирофосфата железа (0,25 г в 10 мл дист. воды), профильтрованные через мембранные

фильтры (с диаметром пор. 0,45 мкм). pH среды доводят до 6,9 при 50 °С добавлением 1 н KOH или 1

н HCl. Среду быстро разливают, слегка взбалтывая флакон для равномерного распределения

активированного угля.
Разлитую среду можно хранить в чашках, помещенных в пластиковые или металлические

контейнеры, в течение 2-х недель.

качестве питательной основы вместо дрожжевого экстракта используется сернокислый гидролизат