Реакция иммуноферментного анализа (ИФА)

антител в сыворотке больных.

концентрации 1 - 10 мкг/мл в фосфатносолевом буфере (ФСБ) pH = 7,2. Планшеты инкубируют при

температуре 37 °С в течение 2 часов или в течение 18 часов при +4 °С. Затем планшеты трижды

отмывают в ФСБ с 0,05% твина 20, просушивают. В лунки сенсибилизированных планшетов вносят

последовательно двукратные разведения исследуемых сывороток (или крови) в объеме 100 мкл.

Разведения сывороток делают на ФСБ с 0,05% твина 20. Начальное разведение сывороток 1:100.

Инкубация 1 час при 37 °С. Затем планшеты трижды отмывают по 5 минут ФСБ с 0,05% твина 20.
    В лунки отмытого планшета вносят конъюгат в рабочем разведении в

объеме
100  мкл  (кроличьи  иммуноглобулины  к  сывороточным глобулинам

человека с
пероксидазой хрена  производства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи). Конъюгат

разводят
тем  же  буфером  с  твином  20.  После 1-часовой инкубации при 37 °С

лунки
планшета  тщательно  отмывают  от  непрореагированного  конъюгата.

Затем в
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

свежеприготовленного

в 0,1
М  цитратно-фосфатном буфере pH = 6,0 в присутствии 0,006% H O .

Инкубируют
                                                            2 2
30  минут в темноте при комнатной температуре. Реакцию останавливают

равным
объемом 1 н раствора серной кислоты.

волны 492 нм. Результаты исследования считают положительными, если титр исследованной

сыворотки превосходит титр отрицательного контроля более чем на 2 разведения при визуальном

учете результатов реакции или оптическая плотность (ОП) исследованной сыворотки более чем в 2

раза превышает показания ОП отрицательного контроля при фотометрическом учете.
За положительные результаты принимают те сыворотки, которые давали титры к L. pneumophila

1:400 и выше.