Методические рекомендации по лабораторной диагностике легионеллеза (болезни легионеров) Методические рекомендации подготовлены сотрудниками Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи амн СССР


Реакция иммуноферментного анализа (ИФА)



Скачать 79.15 Kb.
страница9/14
Дата23.09.2018
Размер79.15 Kb.
ТипМетодические рекомендации
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   14
2. Реакция иммуноферментного анализа (ИФА)
для определения легионеллезного антигена
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Реакция иммуноферментного анализа (ИФА) позволяет определить легионеллезный антиген в

клиническом материале (моча, мокрота, бронхиальные смывы) при экспериментальных и

клинических исследованиях.
Техника постановки реакции
    В  лунки  полистироловых  планшетов  вносят  по  100 мкл

легионеллезных


иммуноглобулинов  в  концентрации  20  - 30 мкг/мл в карбонат-

бикарбонатном


буфере  (КББ) pH = 9,5. Планшеты инкубируют при температуре 37 °С в

течение
2  часов  или  в течение 18 часов при +4 °С. Затем планшеты трижды

отмывают
ФСБ  с  0,05%  твина 20, просушивают. В лунки сенсибилизированных

планшетов


вносят  разведения  исследуемого  материала  (антигена)  в  объеме

100 мкл.
Разведения  антигена делают на ФСБ с 0,05% твина 20. Инкубация 1 час

при 37
°С. Затем планшеты трижды отмывают по 5 минут ФСБ с 0,05% твина 20. В

лунки
отмытого   планшета   вносят  конъюгат  (легионеллезные 

иммуноглобулины  с
ферментом пероксидазы  хрена). Конъюгат разводят тем же буфером с

твином 20


("рабочее разведение" конъюгата  указано  на  этикетке).  После   1-

часовой
инкубации    при    37    °С   лунки   планшета   тщательно  

отмывают   от
непрореагировавшего  конъюгата.  Затем   в лунки планшета вносят по

100 мкл
свежеприготовленного  субстрат-индикаторного  раствора,  содержащего 

0,04%
О-фенилендиамина  в  0,1 М цитратно-фасфатном буфере pH = 6,0 и

присутствии


0,006%  H O .  Инкубируют  30  минут  в  темноте при комнатной

температуре.


         2 2
Реакцию останавливают равным объемом 1 н раствора серной кислоты.
Учет результатов
Реакцию учитывают визуально или фотометрически по изменению окраски субстрата в
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
опытных лунках. Появление желто-оранжевого окрашивания в лунках с антигенсодержащими

пробами при его отсутствии в контрольных отрицательных пробах свидетельствует о положительной

реакции. При фотометрическом учете результатов при 492 нм проба считается положительной, если

ОП опыта в 2 раза и более превышает ОП контроля. В качестве отрицательных контролей

обязательны контроль субстрата и контроль сорбции конъюгата.
Специфичность анализа подтверждается реакцией торможения, избытком легионеллезных

антител и реакцией с гетерологичными антигенами грамотрицательных бактерий.



Каталог: law -> zdravoohranenie--fizicheskaja-kultura-i-sport--turizm -> zdravoohranenie
zdravoohranenie -> Применение ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента в нефрологической клинике
zdravoohranenie -> Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика хламидиозов
zdravoohranenie -> Рекомендации по организации рационального и диетического питания в санаториях-профилакториях
zdravoohranenie -> Вопросы клиники, диагностики, лечения, экспертизы трудоспособности и организации медицинской помощи при интоксикации бензолом
zdravoohranenie -> Методические рекомендации по сопоставлению классификаций болезней, травм и причин смерти седьмого, восьмого и девятого пересмотра
zdravoohranenie -> Методические рекомендации инструктивно-методические рекомендации подготовлены кафедрой инфекционных болезней
zdravoohranenie -> Наставление по лечению и профилактике болезней, вызываемых простейшими кишечника

Скачать 79.15 Kb.

Поделитесь с Вашими друзьями:
1   ...   6   7   8   9   10   11   12   13   14




©zodomed.ru 2024


    Главная страница