Глава 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ЭКСЦИЗИОННОЙ СИСТЕМЫ РЕПАРАЦИИ ДНК У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ И ИХ АНАЛИЗ

С целью оценки частоты распределения полиморфизмов генов, ассоциированных с эксцизионной системой репарации ДНК, у больных псориазом были проведены молекулярно-генетические исследования у 80 больных псориазом и 20 здоровых добровольцев.

В результате проведенных молекулярно-генетических исследований у больных псориазом до лечения (исследование образцов крови) в функционально значимом участке гена XPD нуклеотидные замены в позиции 35931 (АС/AA/CC) были обнаружены у 8-и больных псориазом (10,0%) – (генотип СС); у остальных пациентов генотипы в данной позиции распределялись следующим образом: гомозиготный генотип АА – у 33 пациентов (41,25%) и гетерозиготный генотип АС - у 39 (48,75%). Было установлено отсутствие нуклеотидных замен в позиции 6491 (GG/AA).

При секвенировании функционально значимого участка гена XPC у больных псориазом были обнаружены нуклеотидные замены в позициях 32724 (CC/AA), 32864 (TT/CC), 32828 (СC/GC), 33343 (TT/TA/AA) и 33350 (AA/AG/GG), в том числе:

- у 23 больных (28,75%) была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 32724 С>А, соответствующая гомозиготному генотипу AA (или двум аллелям А); у остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип СС (57/80; 71,25%) .

- у 2 больных (2,5%) была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 32864 T>C, соответствующая гетерозиготному генотипу CТ (аллели С и Т); у остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип ТТ (78/80; 97,5%) ;

- у 7 больных (8,75%) была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 32828 С>G, соответствующая гетерозиготному генотипу GC (аллели С и G); у остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип СС (73/80; 91,25%);

- у 2 больных псориазом (2,5%) была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 33343 Т>A, соответствующая гомозиготному генотипу АA (два аллеля А); у остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип ТТ (78/80; 97,5%);

- у 3-х человек (3,75%) была обнаружена замена нуклеотида в позиции 33350 A>G , соответствующая гомозиготному генотипу GG (два аллеля G); у остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип АА (77/80; 96,25%);

При секвенировании функционально значимого участка гена XPF у больных псориазом были обнаружены нуклеотидные замены:

- в позициях 27945 (TT/TC/CC) и 28095 (GG/AG). При этом у 24 больных псориазом (30%) в позиции 27945 обнаружена замена нуклеотидов 27945 T>C (гомозиготный генотип СС), у 8 больных обнаружена замена нуклеотидов 27945 T>C (гетерозиготный генотип ТС) (10%), у остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип ТТ (55/80; 68,75%);

- у одного больного (1,25%) обнаружена нуклеотидная замена в позиции 28095G>A, гетерозиготный генотип AG (аллели GG, AG), у остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип GG (79/80; 98,75%);

При секвенировании функционально значимого участка гена ERCC1 у 32 больных псориазом были обнаружены нуклеотидные замены в позиции 19007 T>C, гомозиготный генотип CC (9/80; 11,25%), гетерозиготный генотип TC (39/80; 48,75%), гомозиготный генотип TT (32/80; 40%).

При секвенировании функционально значимого участка гена гена XRCC1 у одного пациента регистрировались нуклеотидные замены в позиции 28152 G>A, гомозиготный генотип АА (1,25%); у остальных пациентов выявлен гомозиготный генотип GG (24/80; 30%) и гетерозиготный генотип GA (55/80; 68,75%).

В результате молекулярно-генетических исследований, проведенных у здоровых добровольцев, было установлено,что в позиции 6491 (GG/AA) гена XPD у 10% (n=2) диагностирован генотип АА, у 90% (n=18) – генотип GG. Нуклеотидные замены в позиции 35931 (АС/AA/CC) были обнаружены cсо следующей частотой: у 4-х человек (20,0%) - замена нуклеотидов 35931А>С соответствующая гомозиготному генотипу СС (или двум аллелям С); у остальных пациентов генотипы в данной позиции распределялись следующим образом: гомозиготный генотип АА – у 8-и пациентов (40,0%) и гетерозиготный генотип АС - у 8-и человек (40,0%).

У 7 (35,0%) добровольцев была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 32724 гена XPC (генотип AA), у остальных – гомозиготный генотип СС (13/20; 65,0%). Не обнаружено нуклеотидных замен в позиции 32864 гена XPC. У 5-и добровольцев была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 33343: гетерозиготный генотип TA (25,0%); у остальных – гомозиготный генотип ТТ (15/20; 75,0%). У 7-и добровольцев была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 33350 (у 6-и человек – гетерозиготный генотип AG; 30,0%; у 1–го человека – гомозиготный генотип GG; 5,0%).; у остальных 13-и человек был зарегистрирован гомозиготный генотип АА (65,0%). Не обнаружены нуклеотидные замена в позиции 32864 гена XРС: у 20 человек встречался генотип ТТ.

При секвенировании функционально значимого участка гена XPF у 7-и добровольцев была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 27945 :у 6-и человек – гетерозиготный генотип TC, 30,0% и у 1 человека – гомозиготный генотип CC; 5,0%, у остальных регистрировался гомозиготный генотип ТТ (65,0%). У одного человека была обнаружена замена нуклеотидов в позиции 28095 XPF (гетерозиготный генотип AG; (5,0%), у остальных регистрировался гомозиготный генотип GG (19/20; 95,0%).

При секвенировании функционально значимого участка гена ERCC1 у 8-и здоровых добровольцев были обнаружена нуклеотидные замены в позиции 19007 T>C, гомозиготный генотип CC (3/20; 15,0%); гетерозиготный генотип TC (9/20; 45,0%), остальных пациентов регистрировался гомозиготный генотип TT (8/20; 40,0%).

При секвенировании функционально значимого участка гена гена XRCC1 у 4-х человек регистрировалась нуклеотидная замена в позиции 28152 G>A, гомозиготный генотип АА (20,0%); у остальных пациентов выявлен гомозиготный генотип GG (7/20; 35,0%) и гетерозиготный генотип GA (9/20; 45,0%).

Результаты секвенирования генов эксцизионной системы репарации ДНК, у больных псориазом и здоровых добровольцев приведены в таблице .

Статистический анализ проводился с использованием критерия Х². связи с наличием в исследовании множественных сравнений (до 4) и относительно небольшой выборки, α – уровень значимости для p был снижен до 0,05/4=0,0125 (поправка Бонферрони). В результате сопоставления данных секвенирования генов эксцизионной системы репарации ДНК в группах больных псориазом и здоровых добровольцев не было установлено достоверных различий в частоте встречаемости генотипов АА (OR=0,05; 95% CI 0,0-1, p=0,038) и GG (OR=21,76; 95% CI 1-472,5; p=0,038) гена XPD 6491. Таб.16.

Не различались и частоты генотипов гена XPD в положении 35931: генотип АА (OR=1,05; 95%CI 0,39- 2,86; р=0,44); генотип АС (OR=1,43; 95% CI 0,53-3,86), генотип СС (OR=0,44; 95%CI 0,12-1,66; р=0,44).Таб.17.

Сравнительный анализ полиморфизмов гена ERCC1 19007 не выявил существенных различий в частоте встречаемости генотипов СС (OR=0,72; 95%CI 0,18-2,94); ТС (OR=1,16; 95% CI 0,43-3,11); ТТ (OR=1,0; 95%CI 0,37-2,72), р=0,8894.

Анализ генотипа гена XPC выявил статистически значимые различия в распределении частот генотипов между больными псориазом и здоровыми добровольцами в двух положениях пятнадцатого экзона гена XPC: в положении 33343 и 33350. При этом у больных псориазом наблюдалось достоверно более высокая в сравнении с лицами контрольной группы частота гомозиготного генотипа ТТ в положении 33343 гена XPC (OR=13; 95%CI 2,3-73,36; χ2=12,44; р<0,0001). У лиц контрольной группы отмечалось достоверно значимо более высокая частота гетерозиготного генотипа ТА в положении 33343 гена XPC, в то время как у больных псориазом данный генотип вообще не регистрировался (OR=0,02; 95% CI 0,02-0,33; P<0,0001).

Таблица 19.

Частота генотипов полиморфизма 33343 гена XPC

генотипы	Частота генотипов полиморфизма 33343 гена XPC		р	OR [CI 95%]
	Псориаз (n=80) абс.значение/частота	Контроль (n=20) абс.значение/частота
Генотип AA	2/0,025	0/0,0	<0,0001	1,31 [0,06 – 28,27]
Генотип AT	0/0,0	5/0,25		0,02 [0,00 – 0,33]
Генотип TT	78/0,975	15/0,75		13,0 [2,30 – 73,36]

Кроме этого, у больных псориазом отмечалась достоверно более высокая в сравнении с лицами контрольной группы частота гомозиготного генотипа АА в положении 33350 гена XPC (OR=13,82; 95%CI 3,16-60,39; χ2=17,36; р=0,00039). У лиц контрольной группы отмечено достоверное более высокая в сравнении с больными псориазом частота генотипа AG (у больных псориазом данный генотип вообще не регистрировался) (соответственно 30% против 0%; (OR=0;01 95%CI 0,0-0,26; р=0,00032). Таб. 20.

Сравнительный анализ частот полиморфизмов гена XPC 32724 не выявил существенных различий у генотипа СС (OR=1,33; 95% CI 0,47-3,77; p=0,50) и АА генотипа (OR=0,75; 95%CI 0,27 -2,12; p=0,59). Таб. 21.