Глава 2.Материалы и методы исследования
2.1 Дизайн исследования
Работа проводилась на базе Клиники ФГБУ«НИИ питания» РАМН (рук. – Акад. РАМН, проф. Тутельян В.А.): в отделении болезней обмена веществ (зав. отд. – д.м.н. Шарафетдинов Х.Х.) и лаборатории клинической биохимии, иммунологии и аллергологии (зав. лаборатории – проф. Сенцова Т.Б.), лаборатории спортивного питания с группой алиментарной патологии (зав. – д.м.н., проф. Ханферьян Р.А.).
Обследование больных проводили в два этапа:
1 этап: исследование обмена покоя и метаболизма (биохимия, цитокины, факторы роста и апоптоза), антропометрия и биоимпедансометрия.
2 этап: оценка влияния стандартной диетотерапии и персонализированного лечебного питания на показатели метаболизма пациентов с СД 2 типа и ожирением.
Обследование и лечение больных проводили в период их госпитализации в клинике ФГБУ «НИИ питания» РАМН в отделении болезней обмена веществ или в условиях амбулаторного наблюдения в зависимости от клинических проявлений заболевания.
Все пациенты дали письменное информированное согласие на участие в клиническом исследовании.
После выписки из стационара (через 14 дней от момента госпитализации) пациенты получали рекомендации по дието - и фармакотерапии и к 3-му месяцу госпитализировались в клинику на 3 дня для планового обследования. Таким образом, обследование больных проводили трижды: до начала диетотерапии, через 14 дней пребывания в стационаре и к 3-му месяцу после выписки.
Критерии включения пациентов в исследование: возраст (40-70 лет), наличие СД 2-го типа, ожирения (ИМТ>30кг/м²). Все пациенты дали письменное информированное согласие на участие в клиническом исследовании.
Критерии исключения пациентов из исследования: СД 1 типа, инсулинопотребный СД 2-го типа, нефропатия на стадии протеинурии, хроническая почечная недостаточность, прием нестероидных противовоспалительных средств, наличие хронических заболеваний в стадии обострения и тяжелых аллергических заболеваний в анамнезе, эндокринные формы ожирения, отказ больного от участия в исследовании.
В исследование включено 364 пациента с верифицированным диагнозом СД 2 типа, из них 55,2% женщин и 44,8% мужчин.
Для оценки степени компенсации СД 2 типа использовали критерии, предложенные экспертами европейской группы по политике в области диабета Международной Федерации Диабета (IDF, 1999).
У всех больных на момент первичного обследования установлена стадия метаболической субкомпенсации углеводного обмена (средний уровень Hba1c - 7,4±1,9%).
В зависимости от показателя индекса массы тела (ИМТ) все пациенты были разделены на три группы: 1 группа – 120 пациентов с ожирением I ст., 2 группа – 121 пациент с ожирением II ст., 3 группа – 123 пациента с ожирением III ст. Степень ожирения определяли на основании расчета ИМТ по формуле: ИМТ (кг/м2) = масса тела (кг) / рост² (м) с выделением средних показателей по группам:
-
ИМТ при I степени ожирения - 33,2±1,7кг/м2
-
ИМТ при II степени ожирения - 37,3±1,6кг/м2
-
ИМТ при III степени ожирения - 43,2±2,3 кг/м2
В группу сравнения вошли 18 практически здоровых человек (средний возраст 41,2±3,2 лет) без ожирения (ИМТ – 18-25 кг/м2). Практически здоровыми считались лица, не предъявляющие жалоб, в анамнезе которых не было заболеваний эндокринной системы, органов пищеварения, почек, крови, ревматических заболеваний.
Для оценки эффективности рациона пациенты с СД 2 типа и ожирением методом случайной выборки были разделены на три группы:
-
первая группа A (n=128) получала вариант персонализированной диеты с включением в рацион специализированного пищевого продукта для ЭП Диазона (1600 ккал/сут, ЭП=0,6 ккал/г),
Пациенты СД 2 типа с ожирением I cт. (n=58), II cт. (n=34), III ст. (n=36).
-
вторая группа B (n=133) – только персонализированный вариант диеты (1600 ккал/сут, ЭП=0,4 ккал/г) с контролируемым содержанием белка, жиров и углеводов.
Пациенты с ожирением I cт. (n=45), II cт. (n=54), III ст. (n=34).
-
третья группа С (n=103) - вариант низкокалорийной диеты (согласно приказу Минздрава Российской Федерации от 05.08.2003 г. № 330 «О мерах по совершенствованию лечебного питания в лечебно-профилактических учреждениях Российской Федерации»), включающий основные группы продуктов (хлебные изделия, блюда из мяса и птицы, блюда из рыбы, овощи и фрукты).
Пациенты СД 2 типа с ожирением Icт. (n=38), IIcт. (n=34), IIIст. (n=31).
Эффективность стационарного курса диетотерапии оценивали на основании динамики показателей: массы тела, ИМТ, антропометрии (ОТ, ОБ, ОТ/ОБ), биохимии, цитокинов, факторов роста и апоптоза через 14 дней и через 3 мес.
2.2 Клиническая характеристика пациентов с СД 2 типа и ожирением
Клиническая характеристика больных с ожирением представлена в табл. 1
Таблица 1
Клиническая характеристика больных СД 2 типа с ожирением, (M ± m)
Показатель
|
I ст. ожирения
|
II ст. ожирения
|
III ст. ожирения
|
Возраст, годы
|
44,1±2,6
|
45,3±3,4
|
49,1±2,9
|
Масса тела, кг
|
98,2±3,4
|
105,6±3,4
|
110,9±3,4
|
Индекс массы тела, кг/м²
|
33,2 ± 1,7
|
37,3 ± 1,6
|
43,2 ± 2,3
|
Продолжительность заболевания
|
7,5±2,1
|
7,0 ±1,9
|
7,1±3,0
|
Гликированный гемоглобин, HbA1c, %
|
6,8±1,3
|
7,3±1,9
|
8,1±2,6
|
Средний возраст обследованных пациентов составил 46,1±0,8 лет: в I группе - 44,1±2,6 лет, II группе - 45,3±3,4 лет, III - 49,1±2,9 лет. Продолжительность заболевания СД 2 типа в выборке обследованных пациентов составила 7,2±1,4 года: в I группе - 7,5±2,1 лет, II группе - 7,0 ±1,9 лет, III - 7,1±3,0 лет. Средний уровень гликированного гемоглобина (HbA1c, %) в группах оказался следующим: I группа - 6,8±1,3, II - 7,3±1,9, III - 8,1±2,6.
Из сопутствующих заболеваний у пациентов с СД 2-го типа наиболее часто выявляли заболевания органов пищеварения: хронический калькулезный холецистит (9,1%), хронический некалькулезный холецистит (36,0%), постхолецистэктомический синдром у 12,1%, хронический панкреатит (6,0%), жировой гепатоз (25,5%). Также выявлены сопутствующие заболевания почек: мочекаменная болезнь - 6,0% и хронический пиелонефрит у 24,0% больных. Хронические заболевания легких (ХОБЛ, бронхиальная астма) выявлены у 9,9% пациентов, артериальная гипертензия - у 30,2%. Все хронические заболевания были в состоянии ремиссии.
Диабетическая ретинопатия (ДР) была зарегистрирована у 139 пациентов (38,2%), диабетическая нефропатия (ДН) - у 67 (18,4%), причем высоконормальный уровень микроальбуминурии имел место у 24 (6,6%). Сочетание диабетической ретинопатии и нефропатии имело место у 47 пациентов (12,9%). Выявлена группа без диабетических микроангиопатий - 87 (23,9%).
Детальный анализ встречаемости микроангиопатий при СД 2 типа с ожирением представлен на рис.
Рис.1 Распределение больных с СД 2 типа и ожирением в зависимости от наличия микроангиопатий.
В группе с ожирением I ст. микроангиопатий выявлено не было. При ожирении II ст. микроангиопатии отсутствовали более чем у трети пациентов (38,8%) – в 3,4 раза больше, чем с III cт. ожирения. Препролиферативная форма диабетической ретинопатии была выявлена у 1,6% пациентов с ожирением II ст. и в 2,6 раза чаще (4,1%) – при III ст., однако без статистически значимых отличий. Непролиферативная форма ДР преобладала у больных с СД 2 типа и ожирением III ст. – практически в три раза в сравнении с показателем при ожирении II ст. (46,3% и 13,2% соответственно). Высоконормальный уровень альбуминурии в два раза чаще регистрировали при ожирении II ст. – 9,1% против 4,1% при III ст. Сочетание ДР и ДН в 1,6 раза чаще регистрировали при ожирении III cт.
В комплексе с диетотерапией пациенты с СД 2 типа и ожирением получали адекватную своему клиническому состоянию медикаментозную терапию. При наличии СД 2-го типа больные получали комбинированную (метформин и препараты из группы сульфонилмочевины) сахароснижающую терапию (31%), только метформин (47%), только препараты сульфонилмочевины (9,3% больных). Одновременно проводили фармакотерапию сопутствующих заболеваний: при артериальной гипертензии принимали гипотензивные препараты 110 пациентов: комбинированную терапию (24,5%), включавшую ингибиторы АПФ, β-адреноблокаторы, диуретики, блокаторы кальциевых каналов, только ингибиторы АПФ (29,1%), только β-адреноблокаторы (46,4% больных).
2.3 Описание методов исследования
2.3.1 Антропометрические исследования
В антропометрические параметры исследования включали массу тела, рост, ОТ, ОБ, расчёт ИМТ и соотношение ОТ/ОБ. ОТ измеряли на середине расстояния между нижним краем реберной дуги и гребнем подвздошной кости по среднеподмышечной линии, ОБ – на уровне подвздошного гребня. Для диагностики ожирения использовали ИМТ, определяемого как отношение массы тела в килограммах к квадрату роста в метрах: ИМТ = вес (кг)/рост (м)2. ИМТ в диапазоне от 25,0 до 29,9 соответствовал категории избыточного веса; от 30,0 до 34,9 – ожирению первой степени; от 35,0 до 39,9 – второй степени; ИМТ более 40 – третьей степени.
2.3.2 Определение состава тела методом биоимпедансметрии
Исследования показателей состава тела (содержание жировой массы, тощей массы, массы скелетной мускулатуры, общей жидкости) и антропометрических показателей (масса тела, ОТ/ОБ, ИМТ) пациентов проводили методом биоимпедансометрии с помощью программного обеспечения «Looking'Body» анализатора «InBody 720».
Исследование проводилось натощак или не ранее, чем через 2 часа после приема пищи в положении стоя, босиком на весах и держась обеими руками за рукояти анализатора.
2.3.3 Оценка основного обмена методом непрямой калориметрии
Исследование метаболограммы в условиях обмена покоя проводили методом непрямой калориметрии с помощью мобильного метаболографа «QuarkRMR» (Cosmed, Италия) с авторским программным обеспечением «CosmedRMR» и регистрацией концентрации потребляемого О2, выдыхаемого СО2, дыхательного коэффициента, а также определением метаболических субстратов (белков, жиров и углеводов) комплексе с маской-куполом.
Накануне исследования проводили предварительный инструктаж пациента и подробное описание исследования во избежание стрессовой ситуации в ходе измерения. Пациенту рекомендовали накануне исследования избегать тяжелых физических нагрузок, полноценный сон не менее 8 часов, последний прием пищи за 8-10 часов до исследования.
За 30 минут до начала исследования после прогревания проводили калибровку датчика потока с использованием калибровочного шприца объемом 1,5, а также калибровку кислородного датчика и датчика углекислого газа с помощью стандартных газовых смесей (16% - О2, 5%- СО2, bal. N2), поставляемых в комплекте с прибором фирмы-производителя. Исследование проводили утром, после 7-9 часового сна, в состоянии покоя в помещении с хорошей шумоизоляцией при температуре окружающей среды 21º-23ºС. Пациента помещали на кушетку, его голову и шею накрывали маской-куполом с широкой манжеткой из герметичного материала, которую плотно заправляли под голову и плечи исследуемого для обеспечения герметичности подшлемного пространства. Маску-купол подключали к входному раструбку метаболографа. После чего проводили измерение потребления кислорода и выделения углекислого газа. При этом регистрируемые параметры стандартизировали по температуре, барометрическому давлению и влажности в соответствии с международным протоколом стандартизации STPD.
Расчет действительных энерготрат покоя проводили с использованием модифицированного уравнения Вейра-Ферранини [180].
Е=3,78*VО2+1,16*VCO2-2,98*N, (2)
где Е – скорость энерготрат в состоянии относительного покоя (ккал/сут),VО2-скорость потребления кислорода, л/сутки, VCO2-скорость продукции углекислого газа, л/сутки, N-скорость экскреции азота мочевины мочи, г/сутки.
2.3.4 Лабораторные методы исследования
Клинико-лабораторные исследования проводили на анализаторе фирмы «Konelab 30i» (Финляндия) в лаборатории клинической биохимии, иммунологии и аллергологии (зав. – д.м.н., проф. Сенцова Т.Б.) ФГБУ «НИИ питания» РАМН и лаборатории спортивного питания с группой алиментарной патологии (зав. - д.м.н., проф. Ханферьян Р.А.).
Из общеклинических методов использовали общий анализ крови и мочи, анализ мочи на микроальбуминурию.
Оценку состояния углеводного обмена осуществляли на основании определения уровня базальной гликемии в венозной и капиллярной крови и гликированного гемоглобина с помощью биохимического анализатора «Konelab 30i» (Финляндия) и глюкометра OneTouch ® Ultra ™.
Исследовали содержание биохимических показателей в сыворотке крови (определение общего холестерина (ХС), ХС липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), ХС липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), триглицеридов (ТГ), мочевины, креатинина, мочевой кислоты, активности аланинамино- (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ)).
Содержание TGF β1, IL-1, IL-4, IGF 1 и 2 в сыворотке крови определяли с помощью коммерческих наборов Biosource (BioSourceInternationalInc, Бельгия), уровень sCD153, caspase-8, caspase-9, sFas-L, – методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих наборов Bender MedSystems (Австрия); маркерный антиген апоптоза CD45+CD95+ оценивали на проточном цитофлуориметре FC-500 (Beckman Coulter, США) по программе Cytomics CXP Software.
Для исследования цитокинов сыворотки крови и маркеров апоптоза кровь забирали из локтевой вены в пробирки в утренние часы по истечении не менее 12 часов после последнего приема пищи, центрифугировали при 660 g в течение 15 минут. Аликвоты сывороток крови хранили при t минус 80°С до процедуры проведения анализа.
2.4 Методика диетотерапии. Характеристика используемых диетических рационов у больных СД 2 типа и ожирением
В соответствии с приказом №330 от 05.08.2003 Минздрава Российской Федерации «О мерах по совершенствованию лечебного питания в лечебно-профилактических учреждениях Российской Федерации» пациентам с СД 2 типа и ожирением назначали:
-
группа С - низкокалорийный вариант диеты, включавший основные группы продуктов: хлебные изделия, блюда из мяса и птицы, блюда из рыбы, овощи и фрукты (1600 ккал/сут, химический состав: белки – 87 г, жиры – 53 г, углеводы – 194 г). При этом содержание белков составило 21,7% от энергоценности рациона, жиров – 29,8%, углеводов – 48,5%, что соответствует существующим рекомендациям к химическому составу диеты при СД и МС. В жировом компоненте диеты 46,8% приходилось на долю жиров растительного происхождения. Химический состав и энергетическая ценность низкокалорийного варианта диеты представлен в табл.2.
-
Группа В - персонализированный вариант диеты с контролируемым содержанием белка, жиров и углеводов; энергетическую ценность (ЭЦ) рациона рассчитывали индивидуально по формуле: ЭЦ (ккал/сут) = К×УОО, где К – коэффициент определения физической активности, УОО – уровень основного обмена [Королев А.А., 2007]. Энергетическая плотность данного рациона составляла, в среднем, 1,5 ккал/г.
-
Группа А - персонифицированный вариант диеты, повышение энергетической плотности рациона достигалось включением специализированного продукта для энтерального питания.
Таблица 2
Химический состав и энергетическая ценность низкокалорийного варианта диеты
-
Показатель
|
Уровень потребления
|
Энергетическая ценность, ккал
|
1600
|
Белки, г / %*
В том числе растительные
|
87 /21,7
28,3
|
Жиры, г / %*
В том числе растительные
|
53 /29,8
46,8
|
Насыщенные жирные кислоты, г / %*
Мононенасыщенные жирные кислоты, г / %*
Полиненасыщенные жирные кислоты, г / %*
Холестерин, мг
|
17/9,6
17/10,2
18/10,2
236
|
Углеводы, г / %*
|
194/ 48,5
|
Пищевые волокна, г
В том числе:
Гемицеллюлозы
Клетчатка
Пектин
|
25,6
10,0
9,6
6,0
|
Витамины, мг:
Аскорбиновая кислота
(витамин С)
тиамин (витамин В1)
рибофлавин (витамин В2)
пиридоксин (витамин В6)
ниацин (витамин РР)
витамин А
бета-каротин
витамин Е
|
101,7
0,56
1,18
1,44
11,2
0,3
3,58
10,9
|
Минеральные вещества, мг:
калий
кальций
магний
натрий
фосфор
железо
медь
цинк
хром
|
2682
1009
344
2122
1154
11,7
2,16
12,4
0,18
|
* - в процентах от энергетической ценности рациона.
Характеристика специализированного продукта
для энтерального питания
Компания NutriciaMedicalAdvancedNutrition («N.V.Nutricia», Нидерланды) разработала специализированный пищевой продукт для ЭП «Нутризон эдванст Диазон» (свидетельство о госрегистрации № 77.99.19.4.У.4238.5.09 от 05.05.2009 г.), предназначенный для больных СД в качестве дополнительного источника энергии и микронутриентов.
Таблица 3
Состав специализированного продукта для энтерального питания «Нутризон эдванст Диазон»
№
|
Компонент
|
Единица измерения
|
На 100 мл
| -
|
Энергетическая ценность
|
ккал
|
100
| -
|
Белки
|
г
|
4,3
| -
|
Углеводы
|
г
|
11,3
| -
|
Пищевые волокна
|
г
|
1,5
| -
|
Полисахариды
|
г
|
8,8
| -
|
Сахара
|
г
|
2,4
| -
|
Жиры
|
г
|
4,2
| -
|
Насыщенные жирные кислоты
|
г
|
0,5
| -
|
Линолевая кислота
|
г
|
0,65
| -
|
α-Линоленовая кислота
|
г
|
0,08
|
|
Витамины
|
|
| -
|
Каротиноиды
|
мг
|
0,2
| -
|
Витамин А (бета-каротин)
|
мкг RE
|
82
| -
|
Витамин D3
|
мкг
|
0,7
| -
|
Витамин Е
|
мг аТЕ
|
2,5
| -
|
Витамин К1
|
мкг
|
5,3
| -
|
Витамин С
|
мг
|
15
| -
|
Фолиевая кислота
|
мкг
|
38
| -
|
Витамин В1
|
мг
|
0,15
| -
|
Витамин В2
|
мг
|
0,16
| -
|
Витамин В6
|
мг
|
0,17
| -
|
Витамин В12
|
мкг
|
0,5
| -
|
Ниацин
|
мг
|
1,8
| -
|
Пантотеновая кислота
|
мг
|
0,53
| -
|
Биотин
|
мкг
|
4,0
| -
|
Холин
|
мг
|
37
|
|
Микро – и макроэлементы
|
|
| -
|
Натрий
|
мг
|
100
| -
|
Калий
|
мг
|
150
| -
|
Хлориды
|
мг
|
125
| -
|
Кальций
|
мг
|
80
| -
|
Фосфор
|
мг
|
72
| -
|
Магний
|
мг
|
23
| -
|
Железо
|
мг
|
1,6
| -
|
Цинк
|
мг
|
1,2
| -
|
Марганец
|
мг
|
0,33
| -
|
Медь
|
мкг
|
180
| -
|
Иод
|
мкг
|
13
| -
|
Селен
|
мкг
|
7,5
| -
|
Хром
|
мкг
|
12
| -
|
Молибден
|
мкг
|
10,0
| -
|
Фтор
|
мг
|
0,1
|
Данный продукт содержит в своем составе соевый белок, фруктозу, модифицированный крахмал, смесь растворимых (80%) и нерастворимых (20%) пищевых волокон, имеет модифицированный жировой состав (69% мононенасащенных жирных кислот) с оптимальным соотношением полиненасыщенных жирных кислот n:6/n:3.
2.5 Статистические методы обработки результатов исследования
Полученные результаты обработаны статистически с помощью программы SPSS 17.0 для Windows.В связи с тем, что центральные тенденции и дисперсии имели нормальное и приближенно нормальное распределение, при анализе полученных результатов определяли средние значения признака (M), стандартные ошибки среднего (m), среднеквадратичные отклонения (σ). Результаты представлены в виде средних величин и стандартной ошибки средней величины (M±m). Достоверность различий оценивали с помощью критерия Стьюдента (t) для независимых и связанных выборок при значениях вероятности р < 0,05. Различия групп расценивали как статистически значимые при р < 0,05 или высоко значимые при р < 0,01.
При корреляционном анализе рассчитывали коэффициент корреляции Спирмена, доверительные интервалы коэффициента корреляции, а также значимость его отличия от нуля.
Поделитесь с Вашими друзьями: |