Физические методы структурно-функционального ремоделирования эндометрия у женщин с нарушением репродуктивной функции 14. 00. 01 Акушерство и гинекология 14. 00. 51 Восстановительная медицина, лечебная физкультура и спортивная медицина

Работа выполнена в гинекологическом отделении восстановительного лечения Федерального государственного учреждения «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор МАКАЦАРИЯ Александр Давидович

ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава

доктор медицинских наук, профессор ОРДИЯНЦ Ирина Михайловна

ГОУ ВПО РУДН

доктор медицинских наук ПОРТНОВ Вадим Викторович

ФГУ «ЦКБ с поликлиникой» УДП РФ
Ведущая организация: ГОУ «Санкт-Петербургская медицинская академия имени И. И. Мечникова»
Защита состоится «___» ____________ 2008 г. в ____ на заседании диссертационного совета Д. 208.125.01 при ФГУ «НЦ АГиП им. В.И. Кулакова Росмедтехнологий» (117997, Москва, ул. Академика Опарина, 4).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «НЦ АГиП им. В.И. Кулакова Росмедтехнологий».

Автореферат разослан «___»___________ 2008г.

Нарушения репродуктивной функции женщин являются следствием множества причин, где маточный фактор составляет 24-62%. (Корнеева И.Е., 2005; Oliveira F.G., 2003; Ventolini G., 2004; Sanders B., 2006). В нашей стране в структуре внутриматочной патологии преобладает хронический эндометрит, более чем в 2 раза превышая распространенность других заболеваний (Феоктистов А. А., 2006). Его частота наиболее высока (17,2-67,7%) у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием, неудачами экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) (Волосенок И.В., 2001; Корсак B.C., 2005; Feghali J., 2003), при невынашивании беременности (34-73,1%) (Сидельникова В.М., 2002; Казарян С.М., 2003; Серова О. Ф., 2005). Реже встречаются полипы эндометрия, частота выявления которых колеблется от 12,3 до 32%. Доля женщин с внутриматочными синехиями составляет от 3 до 13%, с миомой матки при субмукозной локализации узлов от 4 до 20% (Корнеева И.Е., 2005; Soares S.R., 2002; Hinckley M., 2004).

В литературе, посвященной проблемам ЭКО и невынашивания беременности, описаны различные вненозологические структурно-функциональные изменения в эндометрии, которые могут быть самостоятельной причиной нарушений репродуктивной функции: расстройства субэндометриального кровотока (Алиева К.У., 2007; Белоусов Д.М., 2007; Jinno M., 2001; Wu H.M., 2003), несоответствие структуры эндометрия дню менструального цикла (Задорожная Т.Д., 2006; Гайворонская О.С., 2007; Серебрянникова К. Г., 2007), склеротические (Кузнецова А.В., 2000) и иммунологические изменения в эндометрии (Гнипова В.В., 2003; Salamonsen L.A., 2002).

Лечение при внутриматочной патологии, как правило, медикаментозное при хроническом эндометрите или хирургическое при наличии полипов эндометрия, внутриматочных синехий, перегородки, субмукозной миомы матки. Хирургическое вмешательство позволяет восстановить анатомическую целостность полости матки в 93-96% случаев, в то время как беременность наступает лишь у 15-50% женщин (Cravello L., 1998; Fernandez H., 2001; Kdous M., 2003; Pabuçcu R., 2004; Romero R., 2004). Лекарственная терапия хронического эндометрита недостаточно результативна, о чем свидетельствует его высокая частота у женщин с нарушением репродуктивной функции, многократно применявших медикаментозное лечение. Включение физических методов в алгоритмы восстановления после гинекологических операций и лечения хронического эндометрита, повышает частоту наступления и вынашивания беременности, оказывает позитивное влияние на состояние рецепторного аппарата эндометрия и маточную гемодинамику (Стругацкий В.М., 2005; Кузьмичев Л.Н., 2006; Серов В.Н., 2006; Радзинский В.Е., 2007).

В настоящее время в гинекологии при выборе оптимальных методов физической терапии доминирует нозологический подход. Однако в общей физиотерапии в последние годы активно обсуждается возможность синдромально-патогенетической терапии физическими факторами. Разработана и внедрена синдромально-патогенетическая классификация физических методов (Пономаренко Г. Н., 1999, 2006), являющаяся эффективным инструментом для дифференцированного выбора лечебных физических факторов в любой медицинской специальности, опираясь на ведущие синдромы или патогенетические варианты различных заболеваний.

В репродуктивной медицине за последние несколько десятилетий разработаны принципиально новые подходы к диагностике и лечению нарушений репродуктивной функции. Происходит интеграция отечественной и мировой медицины. В нашей стране физиотерапия является неотъемлемым компонентом алгоритмов восстановления фертильности. Отсутствие опыта физиолечения гинекологических заболеваний у зарубежных исследователей, создает почву для дискуссии, требующей обоснования включения физических методов в существующие лечебные комплексы. Кроме того, использование лечебных физических факторов при внутриматочной патологии не имеет систематизированного и последовательного характера, не учитывает современных тенденций репродуктивной гинекологии. До настоящего времени не определены патогенетические мишени физических факторов в эндометрии; на современном, клеточном и молекулярном уровне не уточнен механизм их лечебного действия. Не разработаны принципы дифференцированного выбора методов физиотерапии, критерии результативности их использования и способы мониторирования эффективности в процессе лечения. Для изучения поставленных вопросов было проведено настоящее исследование.

Научная оценка роли физических факторов в формировании оптимальных лечебных эффектов предусмотрена рядом направлений научного развития современной физиотерапии, определенных «Концепцией развития здравоохранения и медицинской науки на 2001-2005 годы и на период до 2010 года», Постановлением Президиума Государственного Совета РФ №38 «О развитии курортно-рекреационного комплекса Российской Федерации» от 23 июля 2004 г. Исследование механизмов лечебного действия физических методов у гинекологических больных лежит в русле Национального проекта «Дети России», повышение эффективности лечения бесплодия в условиях сложной демографической ситуации в России – Национального проекта «Здоровье».

Цель исследования: патогенетическое обоснование и разработка концепции структурно-функционального ремоделирования эндометрия физическими факторами электромагнитной природы у женщин с маточным фактором нарушения репродуктивной функции.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи исследования:

1. 
   Изучить динамику за последние 15 лет нозологического состава и основные цели лечения больных с нарушениями репродуктивной функции, получавших физиотерапию.
   
2. 
   Описать характер структурно-функциональных нарушений в эндометрии, сохраняющихся после медикаментозного или хирургического лечения больных с внутриматочной патологией.
   
3. 
   Оценить влияние физических методов лечения на клиническую картину, восстановление репродуктивной функции, течение сопутствующих гинекологических заболеваний, состояние гемодинамики у женщин с маточным фактором нарушения репродуктивной функции.
   
4. 
   Охарактеризовать влияние лечебных физических факторов электромагнитной природы на состояние воспалительного инфильтрата и концентрацию цитокинов, рецепцию стероидных гормонов, ангиогенез, ангиоархитектонику, процессы фиброзирования и регенерации, пролиферацию, апоптоз в эндометрии при хроническом эндометрите.
   
5. 
   Провести анализ преобладающего лечебного действия и эффективности применения использованных физических методов при хроническом эндометрите у женщин с нарушением репродуктивной функции.
   
6. 
   На основании полученных данных разработать способ мониторирования эффективности лечения и стратегию дифференцированного использования физической терапии при маточном факторе нарушения репродуктивной функции.
   

Результаты настоящего исследования показали, что за последние 15 лет в 11 раз увеличилось число больных с маточным фактором нарушения репродуктивной функции среди пациенток, получающих физиотерапию.

Установлено, что медикаментозное и хирургическое лечение пациенток с внутриматочной патологией и нарушением репродуктивной функции не позволяет достичь полного восстановления тканевого гомеостаза, так как сохраняются расстройства микроциркуляции в матке, выявлены изменения баланса цитокинов, факторов ангиогенеза, рецепторов половых гормонов в эндометрии, цервикальной слизи и плазме крови, накопление коллагенов в эндометрии.

Обнаружено, что у пациенток с внутриматочной патологией и нарушением репродуктивной функции, применение лечебных физических факторов вызывает клиническое улучшение и позитивную динамику эхографических параметров эндометрия. Причем, физиотерапия способствует нормализации толщины эндометрия при исходном его истончении без активации процессов пролиферации и подавления апоптотической активности в эндометрии на стадии пролиферации.

Выявлено, что лечебные физические факторы, позитивно влияют на маточную гемодинамику. Причем, наиболее значимые изменения происходят на уровне мельчайших сосудов матки, в то время как гемодинамика в крупных артериальных сосудах (маточные артерии) не претерпевает существенных изменений.

Доказано, что воздействие лечебных физических факторов приводит к структурно-функциональной перестройке эндометрия, что на клеточном и молекулярном уровне проявляет себя снижением количества макрофагов, эпидермального фактора роста, трансформирующего фактора роста, коллагенов III и IV типов, регуляцией соотношения рецепторов стероидных гормонов. Физиотерапия снижает концентрацию провоспалительных цитокинов, регулирует соотношение факторов роста в плазме крови и цервикальной слизи.

Не определено клинических и эходопплерометрических признаков прогрессирования роста миомы матки и эндометриоза, сопутствующих основному заболеванию, в процессе физиотерапии, в период её последействия и в течение 3-х лет дальнейшего наблюдения.

Оценена степень участия физических факторов различной природы в формировании лечебных эффектов и предикторы эффективности физиотерапии при различных формах нарушений в эндометрии. Верифицирована максимальная клиническая эффективность магнитотерапии при преобладании воспаления, а электротерапии – при преобладании фиброза. Обоснована целесообразность синдромально-патогенетического подхода при выборе физического метода для проведения предгравидарной подготовки при маточном факторе нарушения репродуктивной функции, позволяющего увеличить в 1,5-2 раза частоту восстановления репродуктивной функции.

Установлено изменение состава больных, получавших физиотерапию, которое должно переориентировать внимание практических врачей на лечение и профилактику внутриматочной патологии.

Выявлены существенные структурно-функциональные нарушения эндометрия, неустранимые при медикаментозном и хирургическом лечении, снижающие частоту наступления и вынашивания беременности у пациенток с внутриматочной патологией.

На клеточном и молекулярном уровне доказано терапевтическое действие физических методов и обоснована необходимость их включения в существующие алгоритмы подготовки к беременности пациенток с нарушениями репродуктивной функции при хроническом эндометрите и после внутриматочных хирургических манипуляций.

Показана безопасность использования предлагаемых методик при сопутствующих миоме матки и генитальном эндометриозе.

Определены принципы подбора больных и дифференцированного выбора физических методов, дискриминанты клинической эффективности при использовании лечебных физических факторов различной природы.

Предложен способ мониторирования состояния эндометрия в процессе терапии лечебными физическими факторами для определения целесообразности и количества повторных курсов физиотерапии, а также включения в комплекс лечения медикаментозных средств.

Определены параметры эффективных методик терапии физическими факторами электоромагнитной природы для предгестационной подготовки эндометрия. В том числе, разработаны и апробированы оригинальные внутриполостные методики электроимпульсной и динамической терапии бегущим магнитным полем.

Разработана концепция использования физических методов у женщин с маточным фактором нарушения репродуктивной функции на современном этапе. Раскрытие молекулярных механизмов структурно-функционального ремоделирования эндометрия лечебными физическими факторами, позволяет определить их место среди медикаментозных и хирургических методов коррекции внутриматочной патологии. Обоснованный в предлагаемой концепции синдромно-патогенетический подход позволяет дифференцированно использовать апробированные и новые лечебные физические факторы для персонализации лечения, что значительно повышает его результативность.

Положения, выносимые на защиту:

1. 
   После медикаментозного или хирургического лечения больных с внутриматочной патологией и нарушением репродуктивной функции сохраняются различные структурно-функциональные изменения эндометрия, снижающие его имплантационный потенциал и препятствующие успешному развитию беременности.
   
2. 
   Использование физических факторов электромагнитной природы у пациенток с внутриматочной патологией формирует значимый лечебный эффект, связанный с изменением характера менструальной кровопотери, уменьшением болевых ощущений, восстановлением регионарной и органной гемодинамики.
   
3. 
   Индуцированное применением физических методов ремоделирование молекулярных характеристик эндометрия, приводит к восстановлению его рецептивности: регрессу воспаления и фиброза, регуляции процессов ангиогенеза, регенерации и рецепции половых стероидов.
   
4. 
   Эффективность применения лечебных физических факторов различной природы зависит от соответствия преобладающего эффекта лечебного действия, ведущему синдрому или патогенетическому варианту заболевания. Электролечебные физические факторы наиболее эффективны при фиброзе эндометрия, магнитолечебные - при его воспалении.
   
5. 
   Концепция структурно-функционального ремоделирования эндометрия физическими методами у женщин с маточным фактором нарушения репродуктивной функции, основанная на синдромно-патогенетическом подходе к их назначению, повышает эффективность восстановления фертильности в современных алгоритмах лечения бесплодия и невынашивания беременности.
   

Автор принимал непосредственное участие в клиническом обследовании и лечении больных, организовал проведение клинических, инструментальных, лабораторных исследований пациенток, проведение процедур физиотерапии. Диссертантом разработана формализованная история болезни для больных с нарушением репродуктивной функции. Автором лично проведены анализ медицинской документации, выполнено формирование базы данных, статистическая обработка и обобщение полученных результатов, а также обоснована и сформулирована концепция структурно-функционального ремоделирования эндометрия физическими факторами и научно обоснован алгоритм их применения у женщин с нарушением репродуктивной функции.

Материалы диссертации доложены на: V Всероссийском съезде физиотерапевтов и курортологов и Российском научном форуме «Физические факторы и здоровье человека» - Москва, 2002; международном конгрессе «Здравница-2002» - Москва, 2002; научном форуме «Репродукция человека-2003» - Москва, 2003; международном конгрессе «Здравница-2004» - Санкт-Петербург, 2004; V Научно - практической конференции «Проблемы и перспективы санаторно-курортного лечения и реабилитации в здравницах России» - Сочи, 2004; всероссийской научно-практической конференции «Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии» - Волгоград, 2005; съезде акушеров-гинекологов Южного федерального округа «Современные проблемы диагностики и лечения нарушений репродуктивного здоровья женщин» - Ростов-на-Дону, 2005; международном конгрессе «Восстановительная медицина и реабилитация –2005» - Москва, 2005; VII Всероссийском форуме «Мать и дитя» - Москва, 2005; 10-й Поволжской научно-практической конференции «Современные пути решения актуальных проблем акушерства и гинекологии» - Саратов, 2005; Всероссийском конгрессе «Здравница-2006» «Здоровье женщин - залог благополучия России» - Сочи, 2006; VIII Всероссийском форуме «Мать и дитя» - Москва, 2006; 22nd Annual Meeting of European society of human reproduction and embryology (ESHRE) - Прага, 2006; международном конгрессе «Здравница-2007» - Уфа, 2007; XVII Международной конференции Российской Ассоциации Репродукции Человека «Репродуктивные технологии сегодня и завтра» - Казань, 2007; II Регионарном научном форуме «Мать и дитя» - Сочи, 2008.

Материалы диссертации обсуждены на конференции гинекологического отделения восстановительного лечения (05.07.07), заседаниях апробационной комиссии (16.07.07.) и Ученого совета (25.12.07.) ФГУ «НЦ АГиП Росмедтехнологий».

Внедрение результатов исследований

В результате проведённого исследования апробирована и внедрена в лечебную практику концепция подготовки эндометрия к беременности, которая успешно используется в лечебной и учебной работе ФГУ «НЦ АГиП им. академика В. И. Кулакова Росмедтехнологий»; кафедры курортологии и физиотерапии (с курсом медицинской реабилитации) Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова. Сформулированные в диссертации методические принципы легли в основу новой медицинской технологии «Метод предгестационной подготовки эндометрия с использованием магнитной, электроимпульсной и интерференционной терапии» (2006) и включены в новую медицинскую технологию «Применение аппаратно-программного комплекса электро-лазеро-магнитной терапии и цветоимпульсного воздействия КАП-ЭЛМ-01 «Андро-Гин» при лечении гинекологических заболеваний» (2006), рекомендованных Министерством здравоохранения и социального развития РФ для применения на территории РФ.

По теме диссертации опубликовано 48 печатных работ, в том числе 7 – в журналах рецензируемых ВАК, 2 государственных патента на изобретение, 2 новые медицинские технологии.

Морфологические исследования выполнены совместно с д.м.н. Л. С. Ежовой в лаб. патоморфологии ФГУ «НЦ АГиП Росмедтехнологий» (рук.: д.м.н., проф. Н. И. Кондриков); иммуногистохимические исследования выполнены под руководством проф., д.м.н. Е. А. Коган, совместно с докторантом Центра к.м.н. А. В. Шуршалиной на кафедре патологической анатомии ММА им. И. М. Сеченова (зав. каф.: акад. РАН и РАМН, проф. М. А. Пальцев). Иммунологические исследования выполнены совместно с к.м.н. Кречетовой Л. В., к.м.н. Матвеевой Н. К., к.м.н. Соболевой Г. М. в лаб. клин. иммунологии Центра (рук.: акад. РАМН, проф. Г. Т. Сухих). Определение содержания ростовых факторов выполнено в лаб. биохимии Центра (рук.: д.м.н., проф. В. А. Бурлев). Эходопплерометрические исследования выполнены совместно с к.м.н. Белоусовым Д. М. в лаб. функциональной диагностики Центра (рук.: д.м.н., проф. В. Н. Демидов). Результаты исследований отражены в совместных публикациях. Автор приносит глубокую благодарность.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 259 стр. компьютерного текста и состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций и библиографии, включающей 268 источников (141 отечественных, 134 иностранных публикаций). Диссертация иллюстрирована 90 таблицами и 23 рисунками.

Согласно поставленным задачам, проведен анализ клинических данных 819 пациенток с маточным фактором нарушений репродуктивной функции, составивших 2 группы исследования. Ретроспективное исследование включало 600 историй болезни и амбулаторных карт женщин, которые находились на амбулаторном лечении в гинекологическом отделении восстановительного лечения НЦ АГиП за период 1990-1992 гг. и 2005-2007 гг.

Материал проспективного исследования составили 219 женщин с внутриматочной патологией и нарушением репродуктивной функции (рис. 1). I и II группы были сформированы из пациенток с хроническим эндометритом. В III группу были включены женщины после различных внутриматочных манипуляций.

Критериями включения явились: возраст 18-39 лет; наличие маточного фактора бесплодия или невынашивания беременности; регулярный ритм менструаций; отсутствие нарушений гормонального гомеостаза и гемостазиограммы; для I и II групп - наличие гистологической верификации хронического эндометрита; для III группы - эходопплерометрических признаков структурно-функциональных нарушений в эндометрии.

В процессе анализа клинико-лабораторных данных и оценки эффективности терапии были выявлены 2 патогенетических варианта хронического эндометрита, диверсифицирующих результаты физиолечения. В соответствии с выделенными вариантами пациентки I группы были разделены на две подгруппы: с преобладающим синдромом воспаления в эндометрии или преобладающим фибродеструктивным синдромом.

(n=134, 98+36)

Магнитотерапия - подгруппа М

(n=56, 40+16)

Электроимпульсная

терапия – подгруппа Э/1 (n=60, 45+15)

Интерференцтерапия – подгруппа Э/2

(n=74, 53+21)

Рис. 1. Материал проспективного исследования
Для определения показаний, исключения противопоказаний к физиотерапии и отбора в соответствии с выделенными критериями, лечению физическими методами предшествовали: микробиологическое и вирусологическое исследование; расширенная кольпоскопия и цитологическое исследование мазков отпечатков шейки матки; оценка гормонального статуса - определение в крови пролактина, тестостерона, кортизола, дегидроэпиандростендиола; оценка гемостазиограммы; лапароскопия и/или гистероскопия; прицельная биопсия эндометрия, раздельное диагностическое выскабливание или аспирационная биопсия с помощью Pipelle de Cornie; морфологическое исследование соскобов и биоптатов эндометрия; иммуногистохимическое исследование эндометрия. Далее следовало соответствующее диагнозу медикаментозное или хирургическое лечение: у больных I и II группы – медикаментозная терапия, основанная на результатах микробиологического и иммунологического исследования или препаратами широкого антибактериального и противовирусного спектра действия. Женщинам III группы были произведены: при наличии внутриматочных синехий и перегородки - их разрушение, при наличии полипов и субмукозной миомы матки – их удаление.

Лечение физическими методами начинали не ранее чем через 2 недели после предшествующего этапа и не сочетали с какой-либо иной терапией. Всем пациенткам I и III групп с 5-7 дня менструального цикла были назначены воздействия лечебными физическими факторами различной природы. Во II группе физические методы на этапе предгестационной подготовки эндометрия не использовали. Для сравнительной оценки влияния различных физических факторов, методом случайной выборки пациентки I и III групп были распределены на подгруппы, где использовали электролечебные или магнитолечебные методы. Причем, выбор электротерапевтических воздействий был дифференцирован в зависимости от наличия сопутствующих заболеваний органов репродуктивной системы. У больных с сопутствующими миомой матки или генитальным эндометриозом, не требующими на данном этапе хирургического лечения или после него, использовали интерференционные токи. У пациенток без таких сопутствующих заболеваний - электроимпульсную терапию. Лечение осуществляли при помощи отечественных серийно выпускаемых аппаратов: электроимпульсную терапию - комплекса аппаратно-программного ЭЛМ-01 «Андро-Гин»; интерференцтерапию - аппарата «АИТ-01»; магнитотерапию (терапию бегущим магнитным полем) - аппарата «АМУС-01-Интрамаг Ж». Использовали оригинальные методики, разработанные в гинекологическом отделении восстановительного лечения. Всем пациенткам рекомендовали механическую контрацепцию в течение менструального цикла, в котором проводили физиотерапию. Учитывая период последействия использованных физических методов, отмена контрацепции или использование ЭКО у пациенток после магнитотерапии были возможны уже в следующем (после лечения) менструальном цикле; после электролечения – через 1,5-2 месяца.

В I и II группах в идентичные дни менструального цикла до начала и после окончания физиолечения (с учётом эффекта последействия) проводили общеклиническое, специальное гинекологическое, морфологическое и иммуногистохимическое, иммунологическое, эхо-допплерометрическое, реографическое исследования, определение концентрации факторов ангиогенеза и оценку цитокинового статуса. В III группе проводили только общеклиническое, специальное гинекологическое и эходопплерометрическое исследования.

Контрольную биопсию эндометрия с последующим морфологическим и иммуногистохимическим исследованием эндометрия производили с помощью Pipelle de Cornie на 7-10 день менструального цикла.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия проводили методом двойных антител с иммунопероксидазной (стрептовидин-биотиновой) меткой, использовали серийные парафиновые срезы. В качестве первичных антител использовали следующие моноклональные антитела: CD138 — маркер плазматических клеток («Novocastra Lab. Ltd»); CD68 — маркер моноцитов/макрофагов («Dako Cytomation»); EGF — эпидермальный фактор роста («Sygma»); VEGF — сосудистый эндотелиальный фактор роста («Dako Cytomation»); TNF-α - фактор некроза опухоли-α («R&D systems»); TGF-β - трансформирующий фактор роста-β («R&D systems»); ER - рецепторы к эстрогенам типа α («Novocastra Lab. Ltd»); PR - рецепторы к прогестерону типа А и В («Novocastra Lab. Ltd»); Ki-67 - маркер клеточной пролиферации («Dako Cytomation»); Apo-protein - маркер апоптоза («Novocastra Lab. Ltd»); коллагены III и IV типов («Dako Cytomation»).

Оценка иммунного статуса пациенток заключалась в определении субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови методом проточной цитофлуолометрии на приборе «Bio Rad» (США) и определения концентрации иммуноглобулинов классов A, M, G в сыворотке крови методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Интерфероновый статус определяли биологическим методом в соответствии с методическими рекомендациями МЗ РФ (Ершов Ф.И. и соавт., 1996).

Определение концентрации факторов ангиогенеза (VEGF, sVEGF–R1, sVEGF-R2) в сыворотке крови и цервикальной слизи проводили согласно стандартному протоколу иммуноферментным методом с помощью тест-систем фирмы «R&D Systems», США.

Определение содержания цитокинов в сыворотке крови и цервикальной слизи проводили методом иммуноферментного анализа (ELISA) с помощью наборов фирмы «Цитокин» (С-Петербург, Россия) для цитокинов IL-1, IL-6, IL-10, γ-IF, TNF-α. Содержание TGF-β1 - с помощью набора фирмы «Biosource» (США).