Физико-химические свойства нового пространственно-затрудненного фенола и разработка параметров стандартизации его таблетированной формы 14. 04. 02. фармацевтическая химия, фармакогнозия

Назмутдинова Елена Евгеньевна

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Самара – 2011

Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор	Краснов Ефим Авраамович
Официальные оппоненты:
доктор фармацевтических наук, профессор	Лозовая Галина Федоровна
доктор химических наук, профессор	Онучак Людмила Артемовна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «8» ноября 2011 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 208.085.06 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 443079, г. Самара, пр. К. Маркса, 165 Б.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171)

Автореферат разослан «_____»____________ 2011 г.

Ученый секретарь

д

кандидат фармацевтических наук,

доцент И.К. Петрухина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Нарушения мозгового кровообращения представ­ляют собой важную медицинскую и социально-экономическую проблему. Они занимают второе место среди причин смертности населения и первое место среди причин первичной инвалидности.

Одним из основных и универсальных механизмов повреждения клеток ткани мозга в условиях нарушения мозгового кровообращения является оксидантный стресс. Ввиду этого патогенетически обоснованным является применение в терапии нарушений мозгового кровообращения нейропротекторных средств (антиоксидантов и антигипоксантов), способных удалять избыток свободных радикалов и обеспечивать метаболическую защиту головного мозга.

В последнее время резко возрос интерес к производным пространственно-затрудненных фенолов (ПЗФ) в связи с открытием многочисленных аспектов их практического использования. Одним из перспективных низкотоксичных соединений данной группы является новый полусинтетический антиоксидант медиборол (4-метил-2,6-диизоборнилфенол). Медиборол обладает выраженным влиянием на сосудисто-тромбоцитарный гемостаз, нейропротекторной и ретинопротекторной активностью и является основой для создания лекарственного средства профилактического и лечебного действия при свободнорадикальных патологиях в неврологии и офтальмологии.

Для внедрения медиборола в медицинскую практику необходимым этапом и актуальной задачей является изучение его физико-химических свойств, разработка параметров качества субстанции и таблетированной лекарственной формы медиборола, которые гарантировали бы их эффективность и безопасность, и составление проектов фармакопейных статей предприятия (ФСП). В связи с возросшими требованиями к качеству, как фармацевтических субстанций, так и лекарственных препаратов актуальным является проведение валидации методик анализа.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Исследовать физические, химические и физико-химические свойства субстанции медиборола, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы – таблеток.

2. Изучить спектральные характеристики субстанции медиборола методами УФ-, ИК-спектроскопии, масс-спектрометрии, флуориметрии и оценить возможность их использования для стандартизации субстанции медиборола.

3. Провести исследование хроматографического поведения медиборола, исходных и побочных продуктов синтеза методами тонкослойной, газо-жидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии с целью их использования для оценки чистоты субстанции медиборола.

4. Разработать методики количественного определения субстанции медиборола.

5. Установить фармакопейные показатели качества твердой дозированной лекарственной формы медиборола, разработать методики определения количественного содержания медиборола в таблетках.

6. Изучить стабильность и установить сроки годности субстанции и лекарственной формы медиборола.

- методики анализа субстанции медиборола, установлены показатели и нормы качества. Подготовлен проект ФСП на субстанцию медиборола;

- методики и нормы качества таблетированной лекарственной формы медиборола. Подготовлен проект ФСП на таблетки медиборола.

- способ количественного определения медиборола (оформлен заявкой на патент РФ, положительное решение от 30.05.2011 г. по приоритетной справке № 2010131815 от 28.07.2010 г.)

• 
  результаты исследования физико-химических свойств, спектральных характеристик и хроматографической подвижности медиборола;
  
• 
  результаты разработки ВЭЖХ-методики определения посторонних примесей в субстанции медиборола и ее валидированная оценка;
  
• 
  методики количественного определения медиборола в субстанции и таблетированной лекарственной форме;
  
• 
  методики анализа твердой дозированной лекарственной формы медиборола.
  

Автор проводил обработку, обобщение всех полученных результатов и формулировал основные выводы.

Объектами исследований явились серийные образцы субстанции 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (медиборола) (рис. 1, 2), исходные продукты синтеза (камфен, п-крезол), побочный продукт синтеза – 4-метил-2-изоборнилфенол, полученные в Институте химии Коми НЦ УрО РАН, а также таблетированная лекарственная форма «Медиборол 125 мг», разработанная на кафедре фармацевтической технологии СибГМУ.

С₂₇Н₄₀О₁ М.м. 380,61

УФ-спектры медиборола снимали на спектрофотометре СФ-2000-02 (Россия), ИК-спектры получали на приборе IR-80 (Германия), NICOLET 5700 (США). Масс-спектры высокого разрешения при прямом вводе пробы снимали на приборе «Finnigan MAT 8200» (США).

Хроматографирование в тонком слое выполняли в восходящем токе системы гексан-этилацетат 95:5 в герметически закрытых стеклянных камерах, предварительно насыщенных заданной системой, используя хроматографические пластины «Sorbfil» (Россия). Нанесение исследованных образцов на хроматографические пластины осуществляли при помощи капилляров и калибровочных микропипеток. В качестве детектора использовали насыщенный водный раствор перманганата калия.

Исследования методом высокоэффективный жидкостной хроматографии проводили на приборе Agilent Technologies 1200 (США), снабженным диодно-матричным детектором (длина волны детекции – 282 нм). Колонка Zorbax Eclipse XDB С-18, 5 мкм, размер 4,6×150 мм (для исследования примесных соединений) и 4,6×50 мм (для количественного определения медиборола в субстанции и таблетированной лекарственной форме). Подвижная фаза: вода-ацетонитрил (вода бидистиллированная отфильтрованная на системе очистки воды, ацетонитрил квалификации «осч» для градиентной ВЭЖХ фирмы Pancreac, Испания). Объем вводимой пробы – 20 мкл. Обработку полученных данных производили с использованием программного обеспечения Agilent ChemStation.

Вольтамперометрическое определение медиборола проводили на компьютеризированном вольтамперометрическом анализаторе «ТА-2» (ООО «Томьаналит», Россия).
2. Физико-химические характеристики субстанции медиборола

По внешнему виду медиборол (диборнол) представляет собой бесцветные кристаллы или белый, белый с желтоватым оттенком микрокристаллический порошок со специфическим запахом, обладающий липофильными свойствами: практически нерастворим в воде и растворим в неполярных органических растворителях.

В ИК-спектре медиборола в области от 4000 до 400 см^-1 в дисках с калия бромидом (2 мг/400 мг КBr) обнаружены следующие полосы поглощения, _max, см^-1: 3580, 3529, 3449 (ОН-); 3000-2870 (СН₃-,СН₂-), 1605, 1459 (ароматическое кольцо) (рис. 3).

У
А

λ, см-1	λ, нм А
Рис. 3. ИК-спектр медиборола в таблетке с калия бромидом	Рис. 4. УФ-спектр 0,01% этанольного раствора медиборола

При хроматографировании в тонком слое использовали хлороформные растворы медиборола, пара-крезола и 4-метил-2-изоборнилфенола различной концентрации 0,00125-1,0% для нормирования содержания примесей. Наилучшее разделение исследуемых соединений наблюдали в системе растворителей гексан-этилацетат 95:5.

Определение примесей в субстанции медиборола проводили по следующей методике. 0,2 г медиборола растворяли в 10 мл хлороформа (раствор А). К 0,01 мл раствора А прибавляли до 1 мл хлороформа и перемешивали (раствор Б). 0,004 мл раствора А (80 мкг) и 0,001 мл раствора Б (0,2 мкг) наносили на пластинки Sorbfil размером 310 см, высушивали на воздухе в течение 3 мин и помещали в хроматографическую камеру с системой растворителей гексан-этилацетат (95:5), которая является оптимальной подвижной фазой. После прохождения фронтом растворителя около 8 см пластинки вынимали из камеры, высушивали на воздухе в течение 5 мин, затем пропускали через насыщенный водный раствор перманганата калия. На хроматограммах проявлялись бурые пятна медиборола с R_f = 0,80±0,02. В случае наличия примеси п-крезола или моноалкильного производного наблюдаются дополнительные пятна с R_f = 0,11±0,01 и 0,260,02 соответственно, каждое из которых по величине и интенсивности окраски не должно превышать пятно медиборола раствора Б (0,25%). Чувствительность данной методики для медиборола составляет 0,2 мкг, для п-крезола и моноалкильного производного 0,0125 мкг и 0,025 мкг соответственно.

3.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография

В качестве посторонних примесей в субстанции медиборола могут быть как исходные вещества – п-крезол (примесь I), так и промежуточный продукт синтеза – 4-метил-2-изоборнилфенол (примесь II). Наиболее приемлемое разделение исследуемых веществ достигалось при следующих условиях: ПФ вода:ацетонитрил в соотношении 60:40 в режиме градиентного элюирования до соотношения 5:95 в течение 4 мин, скорость потока 1,2 мл/мин, затем вода:ацетонитрил в соотношении 5:95 в режиме изократического элюирования, скорость потока 1,5 мл/мин.

Для проверки пригодности хроматографической системы использовали раствор примеси I (0,005 мг/мл) и примеси II (0,005 мг/мл) в ацетонитриле. Расчет параметров хроматографической системы проводили для пиков п-крезола и 4-метил-2-изоборнилфенола на пяти хроматограммах, полученных в условиях анализа. Степень разделения системного пика, пиков примесей I и II, а также пика медиборола на хроматограмме больше 2. Коэффициент асимметрии пика примеси I составил 0,9, а примеси II – 1,5. Относительное стандартное отклонение площади пиков для примесей I и II равно 1% .



Рис. 6. Хроматограмма модельной смеси медиборола (1 мг/мл)

и примесей I, II (0,005мг/мл) в ацетонитриле

Обозначения: 1– системный пик; 2 – примесь I (2,40 ± 0,02 мин);

3 – примесь II (5,45 ± 0,02 мин); 4 – медиборол (11,40 ± 0,03 мин).

Разработанная ВЭЖХ-методика определения посторонних примесей в субстанции медиборола является специфичной (рис. 6), характеризуется корректной точностью (табл. 1) и воспроизводимостью результатов (табл. 2), линейной зависимостью в аналитической области от 0,01 до 1,0% от основного вещества, принятого за 100 % (рис. 7). Предел обнаружения для примеси I и II составил 0,1 мкг/мл (0,01%) при соотношении аналитического сигнала к фоновому шуму (3:1). Предел количественного определения для примеси I и II составил 0,5 мкг/мл (0,05%) при соотношении аналитического сигнала к фоновому шуму не менее 10:1.

Таблица 2