Т. А. Балаев, И. Б. Бадюгина, Б. Л. Молдавер, Т. А. Асланян, О. М. Беляева

(Генеральный директор — Т.А. Балаев)

На определенных участках полового тракта в норме вегетируют различные микроорганизмы, которые при определенных условиях могут стать вирулентными и участвовать в развитии воспалительных заболеваний.

Спектр возбудителей инфекционных процессов широк: вирусы, бактерии, простейшие, грибы и др. Золотистый стафилококк не входит в состав нормальной микрофлоры нижних половых путей, однако он нередко в небольшом количестве выделяется из влагалища вполне здоровых женщин. Поэтому сам факт его наличия еще не свидетельствует о патологии. Для суждения о его этиологической значимости необходимы количественные исследования.[10]

Золотистый стафилококк остается доминирующим возбудителем мастита (в 80-90%), выделяется при раневой инфекции, абсцессах, сепсисе и может быть причиной инфекции у новорожденных. Штаммы золотистого стафилококка, продуцирующие экзотоксин, нередко вызывают синдром токсического шока, который может быть обусловлен накоплением возбудителя во влагалище на тампонах во время менструации. Штаммы золотистого стафилококка, выделяемые в условиях клиники, в 80-90% устойчивы к бензилпенициллину и ампициллину, так как они образуют бета-лактамазу, разрушающую антибиотики. Многие госпитальные штаммы обладают полирезистентностью к антибиотикам. Возможно формирование вида стафилококка, устойчивого ко всем антибиотикам. Именно по причине того, что стафилококк занимает лидирующую позицию по способности вырабатывать резистентность к антибиотикам и другим противомикробным средствам, лечение стафилококковых инфекций — сложная задача.[10] Среди противомикробных средств отдельное место занимают препараты из лекарственного растительного сырья. Их преимуществом является редкое развитие устойчивости к ним микроорганизмов.

Большое внимание ученых и практиков в последние годы привлекает использование хлорофиллов и их производных в качестве лекарственных средств. Многолетние исследования показали, что хлорофиллсодержащие препараты:

- стимулируют гемопоэз, работу изолированных органов и организма в целом, заживление ран и язв,

-усиливают обмен веществ,

-ускоряют ликвидацию патологических процессов,

-обладают антимутагенными и антиканцерогенными свойствами,

-оказывают антибактериальный и вирусоцидный эффект,

-потенцируют действие антибиотиков.[6]

Однако, вследствие очень сложной структуры молекулы хлорофилла, он является неустойчивым соединением, весьма чувствительным к воздействию кислорода, кислой и щелочной среды, высокой и низкой температуры, света и легко подвергается гидролизу, фотолизу, окислению, дециклизации и другим превращениям.

Очень важным свойством хлорофиллов является возможность замещения магния в порфириновом цикле на другие металлы (цинк, кобальт, медь и т.д.). Образующиеся комплексы, помимо интереса к полученным аналогам хлорофилла как весьма ценным биологически активным веществам, привлекают внимание своей высокой стабильностью, значительно превышающей таковую хлорофилла.

Особое внимание вызывают медные аналоги хлорофиллов (МАХ), обладающие изумрудно-зеленым цветом, весьма устойчивые и являющиеся высоко активными в отношении грамположительной микрофлоры, в особенности – против стафилококков, в том числе антибиотикоустойчивых. [11] К тому же следует отметить, что двухвалентная медь не относится к ядовитым металлам и применяется внутрь в составе известных комплексных препаратов с витаминами.

В России для получения противомикробных, антисептических и противовоспалительных препаратов находят применение Эвкалипт прутовидный и, реже, Эвкалипт шариковый.

Наиболее известен препарат Хлорофиллипт [1,4,6] (выпускавшийся ранее и «Фармацевтической фабрикой Санкт-Петербурга»), полученный из листьев эвкалипта прутовидного и оказывающий бактериостатическое действие на антибиотикоустойчивые стафилококки при концентрации (6,2±0,07) мкг/мл и бактерицидное при (12,6±0,15) мкг/мл. [3]

Несмотря на длительное применение Хлорофиллипта в медицине, производство его и стандартизация имеют ряд недостатков.

Технология Хлорофиллипта [1] многостадийна, длительна, включает тепловую и химическую обработку исходного сырья, содержащего соединения с лабильными фенольными и альдегидными группами, а также неустойчивый хлорофилл. Поэтому при работе с ними требуются охлаждение, защита от света и обеспечение нейтральности среды [1]. При получении Хлорофиллипта ряд операций может отрицательно влиять на сохранение нативности компонентов экстракта.

В связи с этим, в последние годы на ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга» разработан способ получения нового препарата, аналогичного Хлорофиллипту – Галенофиллипт®.[2] Он отличается тем, что при его производстве не проводится отгонка спирта, исключается использование взрывоопасного бензола и удаление его остатков. Известно, что бензол – опаснейший канцероген, который даже в следовых количествах токсичен. Кроме того, нами доказано что хлорофилл в Галенофиллипте превращен в медный аналог, что повышает биологическую активность и стабильность препарата. Таким образом, благодаря новой технологии удалось максимально обеспечить сохранность и эффективность действующих веществ, добиться отсутствия избытка меди, повысить экологичность и безопасность производства. Галенофиллипт - препарат, который сочетает в своем составе комплекс биологически активных веществ – эфирные масла (основные компоненты – цинеол и пинены), фенолоальдегиды (эуглобали) и медные аналоги хлорофиллов (феофитинаты меди). Каждый из компонентов Галенофиллипта обладает выраженной противомикробной активностью, а в комплексе они оказывают мощный противомикробный эффект, сравнимый, а по некоторым показателям — превосходящий эффект хлорофиллипта и многих антибиотиков.

По заказу и при участии ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга» сотрудниками Института Токсикологии под научным руководством доктора медицинских наук В.К. Суханкина было проведено доклиническое экспериментальное изучение общетоксической, аллергенной и специфической фармакологической активности препарата Галенофиллипт, доказаны его безвредность и отсутствие аллергизирующих свойств. [8]

Исследована антимикробная активность Галенофиллипта в опытах in vitro. Работа выполнялась в соответствии с «Методическими указаниями по изучению противомикробной активности фармакологических веществ». [9] Были использованы музейные штаммы микроорганизмов: грамположительные кокки – Staphylococcus aureus-209 P; грамотрицательные палочки – Escherichia coli-88; спорообразующие палочки – Clostridium difficile-4938 и грибы Candida albicans-674, а также полевые штаммы Pseudomonas aerugenosa и Salmonella typhi suis. Для сравнения использованы бензилпенициллин, эритромицин, олеандомицин, стрептомицин, тетрациклин и левомицетин. Установлено, что Галенофиллипт обладает выраженным антимикробным действием в концентрациях, сопоставимых с их эффективными дозами. Он обладает более широким спектром действия по сравнению с большинством антибиотиков, применяемых в медицинской практике.[9] Биоцидные свойства Галенофиллипта и Хлорофиллипта сопоставимы, вместе с тем, при низкой микробной нагрузке (10⁴ КОЕ/мл) Галенофиллипт по действию на грамположительные бактерии в 2 раза активнее. Препарат оказывает биоцидное действие на представителей как нормальной, так и условно-патогенной микрофлоры, несколько превосходя в этом отношении препарат сравнения.

Сравнительный анализ антимикробной активности Хлорофиллипта и Галенофиллипта в опытах in vivo проводился сотрудниками ФГУ «Российский НИИ травматологии и ортопедии имени Р.Р.Вредена» ( Санкт-Петербург ) под руководством проф. Г.Е. Афиногенова на модели стафилококковой локализованной инфекции в кожно-мышечной ране у белых мышей.[7] Всего было использовано 66 животных (3 группы по 22 мыши). Для воспроизведения стафилококковой локализованной инфекции использовали клинический изолят №4559, штамм Staphylococcus aureus, полученный из инфицированной раны левой голени больного, устойчивый к бензилпенициллину, оксациллину, гентамицину, эритромицину и линкомицину. Длительность лечения и наблюдения составляла 10 дней.

На пятые сутки наблюдения у животных контрольной группы сохранялась выраженная лейкоцитарная инфильтрация зоны воспаления, отграничение ее молодыми грануляциями имело очаговый характер. Гнойное воспаление распространялось в толщу мышечной ткани, приобретая характер флегмонозного. В экссудате и в окружающих тканях обнаружено большое количество кокков, образующих скопления.

У животных, леченных Хлорофиллиптом, к этому сроку исследования происходила дальнейшая эпителизация участка воспаления, наблюдалось снижение количества лейкоцитов в экссудате и отграничение очага созревающей грануляционной тканью. Кокки встречались не повсеместно, диффузно, в незначительном количестве.

У животных, леченных Галенофиллиптом, раневой дефект был заполнен созревающими грануляциями, в которых встречались единичные макрофаги с кокками в цитоплазме. По краям дефекта наползали листки эпидермиса, почти полностью покрывавшие его поверхность.

Через 10 суток после начала эксперимента у животных контрольной группы (без лечения) происходило очищение очага воспаления через свищевой канал.

К этому сроку наблюдения у животных, леченных Хлорофиллиптом, сохранялись очаги воспаления, заполненные белковыми массами, в которых также встречались скопления лейкоцитов и небольшое количество кокков.

У животных, леченных Галенофиллиптом, через 10 дней наблюдалась почти полная эпителизация и замещение воспалительного дефекта созревающей грануляционной тканью, в которой встречались единичные макрофаги и кокки.

Таким образом, применение препаратов Хлорофиллипт и Галенофиллипт по сравнению с контролем без лечения способствует более быстрому освобождению от микробов глубоких слоев раны и отграничению очага воспаления грануляционной тканью. Динамика этих показателей была более выражена при применении Галенофиллипта, его использование стимулировало макрофагальную реакцию в более ранние, чем у Хлорофиллипта, сроки.[7]

Помимо высокой противомикробной активности, экспериментально установлена выраженная эффективность Галенофиллипта при язвенном поражении желудочно-кишечного тракта: препарат снижает количество деструктивных участков слизистой ЖКТ. Данные исследований свидетельствуют о высокой эффективности препарата при заболеваниях и поражениях пародонта. Назначение Галенофиллипта нормализует уровень оксипролина — специфической аминокислоты фибриллярного белка коллагена, снижает процессы перекисного окисления липидов и цитолиза, значительно ускоряет регенерацию тканей пародонта.[8] Эффективность препарата во многом объясняется его антигипоксическим и антиоксидантным действиями, которые оказывают положительный эффект на процессы регенерации и репарации.

изучалась сотрудниками Института Токсикологии под научным руководством д. м. н. В.К Суханкина. Сравнивалась эффективность Галенофиллипта на модели эрозии шейки матки с эффективностью зарегистрированного препарата солковагина производства фирмы Solco Basel AG, Швейцария.[8]

Эксперименты проводили на белых беспородных крысах-самках массой 180-200г. Крысу перед нанесением ожога наркотизировали кетамином в дозе 30 мг/кг внутримышечно. Во влагалище через воронку вводили разогретый до 100°С медный стержень, вызывая ожог шейки матки. Контакт стержня и шейки матки длился 2-3 сек. После ожога в это же отверстие вводили 2 капли 5% водного раствора едкого натра для изменения кислотной среды влагалища. Лечение начинали через сутки; при этом препараты вводились во влагалище в количестве 3 капель курсом 7 дней.

Отмечали динамику регенерации и гистологическую картину. Кроме этого, в периферической крови общепринятыми способами определяли показатели выраженности воспалительных процессов (количество лейкоцитов, содержание лимфоцитов и нейтрофилов, СОЭ, СРБ и фибриноген) и показатели перекисного окисления липидов (ПОЛ).

Для гистологического исследования крыс умерщвляли декапитацией в динамике и после окончания эксперимента. Контрольных крыс умерщвляли тем же способом.

Шейку матки фиксировали в 10% формалине и после спиртовой проводки заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином и изучали под микроскопом.

Обработка данных выполнялась с помощью простого сравнения средних по t-критерию Стьюдента.

Наблюдение за течением эрозивно-воспалительного процесса у животных без лечения показало, что макроскопически слизистая оболочка влагалищной части шейки матки была темно-красной, отечной, местами с изъязвлениями.

Гистологически у крыс с ожогом слизистой наблюдались некробиоз эпителия, отек и инфильтрация полиморфноядерными лейкоцитами подслизистого слоя. Клеточные границы эпителия влагалищной части матки были неразличимыми, ядра пикнотичными и деформированными. Местами эпителий отсутствовал.

В группе крыс, леченых Галенофиллиптом, макроскопически слизистая оболочка шейки матки была бледно-розовой и не отличалась от контроля.

После аппликации солковагина на участке шеечной эрозии и зоны перестройки эпителия происходила девитализация эктопированного цилиндрического эпителия и субэпителиальной стромы эрозии шейки матки. Многослойный и устойчивый эпителий шейки матки и влагалища при этом сохранялся. Девитализированная ткань сохранялась и образовывала защитный слой, который через несколько дней замещался собственным плоским эпителием.

При гистологическом исследовании шейки матки у крыс после аппликации «Галенофиллипта» наблюдалась полная эпителизация поверхности эрозии. Эпителий, покрывающий слизистую шейки, был многослойным, плоским, неороговевшим. Воспалительная инфильтрация в подслизистом слое отсутствовала. В подслизистом слое были видны коллагеновые соединительнотканные волокна и единичные полиморфноядерные лейкоциты и капилляры.

Морфологические данные подтверждались результатами биохимических и гематологических исследований (таблицы 1 и 2).
Таблица 1

Влияние препаратов Галенофиллипт и Солковагин на активность ферментов плазмы крови в ходе эрозивно-воспалительного процесса во влагалище крыс, М±m
Группа
животныхСтатистический
показательЩФ,
мккат/лМДА,
нмоль/мг белкаКаталаза,
мг/мл в минКонтрольная I
(интактные)M±m

n0,54±0,06

100,95±0,03

10160±10

n1,26±0,07*

102,35±0,15*

1060±15

n0,62±0,07

101,12±0,18

10140±10

n0,60±0,05

100.98±0.03

10130±20

Эрозия вызывала достоверное увеличение скорости процессов пероксидации липидов в организме: увеличивалось содержание МДА, снижался уровень антирадикальной защиты ― каталазы. Увеличивался уровень ЩФ, что можно рассматривать как результат цитолиза. Назначение обоих препаратов снижало уровень процессов ПОЛ и цитолиза, что благоприятно сказывалось на регенерации тканей шейки матки.

ПоказателиКонтрольн. I

Данные таблицы 5.2 свидетельствуют о купировании воспалительного процесса в тканях влагалища и шейки матки под влиянием обоих препаратов, причем эффективность Галенофиллипта одинакова с эффективностью солковагина.

По эффективности новый препарат не уступает, а по некоторым показателям, даже превосходит зарегистрированный препарат с аналогичным действием — солковагин. Эффективность Галенофиллипта во многом определяется его антигипоксическим и антиоксидантным действиями, которые оказывают положительный эффект на процессы регенерации и репарации.

Сочетание натуральных компонентов и ценных свойств Галенофиллипта обеспечивают эффективное и быстрое лечение ряда инфекционных воспалительных заболеваний при его местном и внутреннем применении.

Препарат имеет широкий спектр показаний и с большим успехом используется в практике оториноларингологов, стоматологов, хирургов, гастроэнтерологов, терапевтов и гинекологов.

ЛИТЕРАТУРА

1. 
   А. с. № 801341 СССР. Способ получения хлорофиллипта из листьев эвкалипта прутовидного. В.Л.Надтока, Божко Н.Г., А.А. Гришко 1979.СССР.
   
2. 
   Патент на изобретение №232 0360. Способ получения лекарственного препарата, содержащего медные аналоги хлорофилла. ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга» (RU), дата приоритета 26.06.2006
   
3. 
   Сравнительная химиотерапевтическая активность Галенофиллипта и Хлорофиллипта /Г.Е Афиногенов, Т.А. Балаев [и др.] Фармация из века в век. Тр. науч.- практ. конф.СПбХФА.-2008. ч. 5.-С.23-30.
   
4. 
   Микрофлора женских половых путей и ее чувствительность к антибактериальным препаратам/ С.Д. Воропаева. Антибиотики и химиотерапия №3. Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, 1999, с.42-45. Москва.
   
5. 
   Моисеева М.В., Михайлец Т.А.. Применение производных хлорофилла в медицине / Изучение и применение лечебно-профилактических препаратов на основе природных биологически активных веществ. Под ред. В.Г. Беспалова и В.Б. Некрасовой. – СПб.: Эскулап, 2000.- 468 с.
   
6. 
   Надтока В.Л. Отечественный антибактериальный препарат хлорофиллипт // Антибиотики. – 1970 - №10, С.888-892.
   
7. 
   Надтока В.Л. Хлорофилипт. Экспериментальные клинические исследования: автореф. …. докт. мед. наук. Харьков.- 1970.- 35 с.
   
8. 
   Надтока В.Л. Применение хлорофиллипта для лечения и предупреждения стафилококковых заболеваний: метод. рекомендации. Харьков.- 1975.- 23с.
   
9. 
   Суханкин В.К.Отчет о доклиническом экспериментальном изучении общетоксической, аллергенной и специфической фармакологической активности препарата «Галенофиллипт».,СПб.: Институт токсикологии.-2006.- 158 с.
   
10. 
    Суханкин В.К.Отчет о доклиническом экспериментальном изучении сравнительной фармакологической активности (противомикробного действия) препарата «Галенофиллипт» в сравнении с препаратом «Хлорофиллипт». СПб.: Институт Токсикологии.- 2006.- 32 с.
    
11. 
    El-Nakeev A., Yoset R.T. Antimicrobical Activity of Sodium Copper Chlorophyllin // Pharmazie, 29, M, 1974.