Исследование дурмана индейского с целью разработки нового ранозаживляющего геля

С целью местного лечения ран широко применяют антимикробные препараты, в частности антибиотики – тетрациклин, левомицетин, гентамицин и др. Их недостатком является ограничение применения из-за индивидуальной непереносимости, а также развитие устойчивой раневой микрофлоры. Одним из путей решения данной проблемы является использование антимикробных фитопрепаратов на основе календулы, прополиса, зверобоя и др. Для данных лекарственных средств характерно сочетание выраженного фармакологического действия с минимальным отрицательным воздействием на организм. К их недостаткам следует отнести отсутствие болеутоляющего действия. В связи с этим особый интерес вызывают растения рода дурман (Datura L.), обладающие антибактериальными, противогрибковыми, противовоспалительными, а также местноанестезирующими свойствами [5–9].

Поэтому целью нашей работы является разработка нового ранозаживляющего геля на основе дурмана индейского (Datura innoxia Mill.). Используя декомпозиционный подход, первым шагом исследований было предварительное фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с сырьем дурмана обыкновенного − официнального растения Государственной Фармакопеи Украины (ГФУ).

Материалы и методы исследований

Объектами исследований являлись листья и семена видов дурмана индейского и дурмана обыкновенного. Листья заготавливали в июле–августе, а семена – в течение сентября–октября 2012 г.

С помощью общеизвестных химических реакций и методик [1, 2] был проведен сравнительный качественный анализ групп биологически активных веществ (БАВ) листьев и семян дурманов индейского и обыкновенного.

Методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) изучали фенольные соединения и алкалоиды исследуемого сырья.

Для определения фенольных соединений получали водно-спиртовые извлечения по следующей методике. 5,0 г измельченного растительного сырья заливали 50 мл 50 %-ного спирта и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 20 мин, после чего извлечение охлаждали и фильтровали. 5 мл фильтрата упаривали насухо, сухой остаток растворяли в 0,5 мл 96 % спирта. В качестве неподвижной фазы использовали пластину для ТСХ на алюминиевой фольге Silicagel 60 F₂₅₄ с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Merck». Хроматографирование проводили в системе растворителей н-бутанол – уксусная кислота – вода (4:1:2), в качестве веществ-«свидетелей» использовали фармакопейные стандартные образцы (ФСО) рутина и кверцетина. Полученную хроматограмму обрабатывали 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида и анализировали в видимом и ультрафиолетовом (УФ) свете с длинами волн 254 и 366 нм.

Определение алкалоидов осуществляли на хроматографической пластинке на алюминиевой фольге Alugram Sil G с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Macherey-Nagel» по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2].

Количественное содержание суммы флавоноидов определяли методом спектрофотометрии окрашенных комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом в пересчете на рутин [1]. Содержание суммы алкалоидов определяли методом обратной алкалиметрии по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2] в пересчете на гиосциамин.

Результаты и обсуждение

В табл. 1 приведены результаты сравнительного анализа сырья дурманов индейского и обыкновенного.

Таблица 1

Сравнительный качественный анализ сырья видов дурмана обыкновенного и индейского

Классы БАВ	Реактивы	Лекарственное растительное сырье
		листья д. обыкно-венного	семена д. обыкно-венного	листья д. индейского	семена д. индейского
Поли-сахариды	96 % этанол	+	+	+	+
Кумарины	лактонная проба	+	+	+	+
Флавоноиды	цианидиновая реакция	+	+	+	+
	раствор железа (III) хлорида	+	+	+	+
Дубильные вещества (конденси-рованные)	раствор железо аммонийных квасцов	+		+	
Алкалоиды	реактив Драгендорфа	+	+	+	+
	раствор кислоты пикриновой	+	+	+	+

Примечание: + - присутствие, − - отсутствие классов БАВ в исследуемом сырье.

Качественный состав классов БАВ сырья исследуемых видов оказался практически идентичным. В листьях и семенах обоих видов дурмана установлено наличие полисахаридов, кумаринов, флавоноидов и алкалоидов; в листьях также обнаружены конденсированные дубильные вещества. На рис. 1 приведена схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья изучаемых видов дурмана.

Рис. 1. Схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – рутин, B – кверцетин, C – семена дурмана обыкновенного, D – семена дурмана индейского, E – листья дурмана обыкновенного, F – листья дурмана индейского; 1−15 – обозначения хроматографических зон

Данные относительно рассчитанных величин коэффициента удержания (R_f) и окрашивания хроматографических зон в видимом и УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида для полученной хроматограммы фенольных соединений представлены в табл. 2.

По величине R_f и характеру хроматографического поведения в сравнении со стандартным веществом в листьях исследуемых видов идентифицирован кверцетин. По характерной флуоресценции в УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида можно предположить, что хроматографические зоны 5, 6, 7 относятся к кумаринам и/или гидроксикоричным кислотам.

На рис. 2 приведена схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья исследуемых видов дурмана.

Рис. 2. Схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – смесь ФСО гиосциамина сульфата и скополамина гидробромида, B – листья дурмана индейского, C – листья дурмана обыкновенного, D – семена дурмана индейского, E – семена дурмана обыкновенного; 1−9 – обозначения хроматографических зон

Данные относительно рассчитанных величин R_f и окрашивания хроматографических зон в видимом свете представлены в табл. 3.

Таблица 3

По результатам проведенного хроматографического анализа на алкалоиды в сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского идентифицированы гиосциамин и скополамин, в листьях дурмана индейского идентифицирован скополамин.

Наибольшее количественное содержание суммы флавоноидов установлено в листьях дурманов обыкновенного и индейского (3,87 ± 0,17 % и 3,20 ± 0,15 % соответственно), наименьшее – в семенах видов дурмана обыкновенного и индейского (1,15 ± 0,12 % и 1,03 ± 0,12 % соответственно) .

Наибольшее содержание суммы алкалоидов установлено в сырье дурмана индейского (0,59 ± 0,03 % и 0,41 ± 0,05 % соответственно для семян и листьев) и несколько меньше – в сырье дурмана обыкновенного (0,28 ± 0,03 % и 0,23 ± 0,02 % соответственно для листьев и семян).

Метрологические характеристики проведенных исследований количественного содержания БАВ в сырье изучаемых видов представлены в табл. 4.

Таблица 4

Растительное сырье	Параметры
	n			s		P	t(P,)
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
Определение суммы флавоноидов
Листья дурмана обыкновенного	5	4	3,87	0,19	0,09	0,95	2,13	0,39	0,17	4,37
Семена дурмана обыкновенного	5	4	1,15	0,13	0,06	0,95	2,13	0,26	0,12	10,05
Листья дурмана индейского	5	4	3,20	0,17	0,08	0,95	2,13	0,34	0,15	4,70
Семена дурмана индейского	5	4	1,03	0,14	0,06	0,95	2,13	0,27	0,12	11,93

Таким образом, сравнительное фитохимическое изучение сырья видов дурмана обыкновенного и индейского выявило возможность использования сырья дурмана индейского с целью создания новых лекарственных препаратов на его основе.

1. Проведено фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с аналогичным сырьем официнального растения ГФУ – дурмана обыкновенного.

2. Качественное сравнение состава БАВ объектов исследования показало их подобность. С помощью методов ТСХ из фенольных соединений идентифицирован кверцетин в листьях исследуемых видов, из алкалоидов определены гиосциамин и скополамин в сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского, а также в листьях дурмана индейского – скополамин.

3. По результатам количественного определения отдельных групп БАВ максимальное содержание суммы флавоноидов установлено для листьев дурманов обыкновенного и индейского и наименьшее – для семян обоих видов. Содержание суммы алкалоидов наибольшее для семян и листьев дурмана индейского, и меньшее – для сырья дурмана обыкновенного.

1. 
   Государственная фармакопея СССР XI издание. Вып. 1, 2. – М.: Медицина, 1987, 1990. – 335 с., 400 с.
   
2. 
   Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». – 1-е вид. – Доповнення 4. – Х.: Державне підприємство Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». – 2011. – 540 с.
   
3. 
   Лагвилава Т. О., Зиновьев Е. В., Ивахнюк Г. К. и др. Ранозаживляющие средства на основе карбополов // Известия СПбГТИ (ТУ). – 2013. – № 18 (44). – С. 47–52.
   
4. 
   Привольнев В. В., Каракулина Е. В. Основные принципы местного лечения ран и раневой инфекции // Клиническая Микробиология и Антимикробная Химиотерапия. – 2011. – Т. 13.– № 3. – С. 214–222.
   
5. 
   Abbas D. A. Analgesiac, anti-inflammatory and antidiarrhoeal effects of Datura stramonium hydroalcoholic leaves extract in mice // International Journal of Research and Reviews in Applied Sciences. – 2013. – V. 14 (1). – P. 193199.
   
6. 
   Al-Sarai A. A. H., Abbas D. A., Al-Rekabi F. M. K. Some toxicological impacts and invitro antibacterial activity of Datura innoxia extract in rats // Kufa Journal For Veterinary Medical Sciences.  2011.  V. 2, N 1.  P. 132145.
   
7. 
   Kumar A., Garg B. R., Rajput G. et al. Antibacterial activity and quantitative determination of protein from leaf of Datura stramonium and Piper betle plants // Pharmacophore. – 2010. – V. 1 (3). – P. 184195.
   
8. 
   Sakthi S. S., Geetha M., Saranraj P. Pharmacological screening of Datura metel and Acalypha indica for its antifungal activity against pathogenic fungi // International journal of pharmaceutical science and health care. – 2011. – V. 2.  P. 1530.
   
9. 
   Shanmuga Priya K., Gnanamani A., Radhakrishnan N., Mary Babu // Healing potential of Datura alba on burn wounds in albino rats // Journal of Ethnopharmacology. – 2002. – V. 83.  P. 193199.