Медведева Т.В., Скворцова Р.Г., Кузьменко В.В., Огарков О.Б.
.
В пособии представлены основные сведения об одном из современных методов диагностики – полимеразной цепной реакции (ПЦР). Дано описание всех его этапов – преаналитического, аналитического и постаналитического. Подробно освещены особенности использования ПЦР для диагностических целей, интерпретации результатов применения этой методики, обсуждаются ее преимущества и недостатки в сравнении с другими методами диагностики инфекций.
Рецензенты: Доктор медицинских наук, профессор Ю.В. Котловский
Оглавление 3
Введение 6
История открытия ПЦР и разработка метода ПЦР 7
Механизм полимеразной цепной реакции 9
Основные компоненты ПЦР 9
Праймеры. 9
Полимераза. 9
Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты. 9
Ионы двухвалентных металлов. 9
Буферы. 10
Анализируемый образец. 10
Циклический температурный режим 10
Стадии постановки ПЦР 11
Пробоподготовка (выделение ДНК/РНК) 12
Амплификация 14
Факторы, влияющие на эффективность амплификации 15
Использование «горячего старта» при постановке ПЦР 16
Приборное обеспечение 16
Регистрация результатов 17
Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней 20
Микробиологический метод 21
Иммунологический метод 22
Микроскопия 22
Генотипический метод (ПЦР) 23
Преимущества ПЦР перед другими методами клинической лабораторной диагностики 24
Универсальность процедуры выявления различных возбудителей 24
Специфичность 25
Чувствительность 25
Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа) 26
Возможность экспертизы. 27
Исследуемый биологический материал 27
Локализация возбудителей 27
Правила забора материала и транспортировки клинического материала для ПЦР-диагностики 28
Кровь, плазма, сыворотка 29
Соскоб с эпителиальных клеток для выявления ДНК возбудителей инфекций, передающихся половым путем 30
Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью НК. 30
Правила подготовки больного для ПЦР-диагностики урогенитальных инфекций 31
Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей 32
Моча 32
Мокрота 33
Синовиальная жидкость 33
Другие биологические жидкости 33
Секционный материал 33
Применение метода ПЦР в медицине 33
Диагностическое значение ПЦР-исследований в клинике инфекционных заболеваний 34
Гепатит А (HАV), Е (HЕV) 36
Гепатит В (HВV) 36
Гепатит D (ВГD) 37
Гепатит С (HCV) 38
Использование ПЦР в пульмонологии и фтизиатрии 40
Применение ПЦР в урогинекологической практике. 42
Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции 43
Криминология 47
Установление отцовства 48
Персонализированная медицина 49
Клонирование генов 50
Онкология 51
Применение ПЦР в практике службы крови 51
Управление качеством ПЦР-исследований 52
Документы, регламентирующие использование методов генодиагностики инфекций 52
Основные принципы организации ПЦР-лабораторий 53
Порядок проведению работ в лаборатории 55
Обеспечение качества в ходе ПЦР-исследований 56
Преаналитический этап 57
Аналитический этап 59
Контроль качества ПЦР-исследований 61
Контроль реакции амплификации 62
Внутренний контроль ВКО 64
Проблема контаминации 64
Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами 66
Постаналитический этап 67
Заключение 71
Вопросы для самопроверки 72
Ответы на вопросы для самопроверки 76
Список цитированной литературы 77
Приложение 77
Возможности ПЦР-диагностики в ГУЗ ИОККДЦ 77
Комплекс исследований на заболевания, передающиеся половым путем (ЗППП), 2Ж3001 77
Хламидиоз, 2Ж3002 78
Туберкулез, 2ЖЗ003 79
Гепатит С, 2Ж3004 80
Микоплазма гоминис, 2Ж3005 81
Трихомониаз, 2Ж3006 81
Гепатит В, 2Ж3007 82
Уреаплазма, 2Ж3009 83
Папиллома (ВПЧ с определением онкогенности), 2Ж3010 83
Гонорея, 2Ж3011 84
Гепатит С количественный, 2Ж3012 86
Генотипирование вируса гепатита С, 2Ж3013 86
Микоплазма гениталиум, 2Ж3015 87
ЦМВ, 2Ж3019 88
Вирус Эпштейна-Барр, 2Ж3020 89
Вирус герпеса 1-го и 2-го типов, 2Ж3021 90
Вирус герпеса 6-го типа, 2Ж3022 90
Токсоплазмы гондии, 2Ж3023 91
Энтеровирус, 2Ж3027 92
Гепатит В количественный, 2Ж3031 93