9. Секвенирование ДНК. Методы Максама-Гилберта и Сенгера. Проект «Геном человека». Секвенирование – определение последовательности расположения нуклеотидов в ДНК. Выделяют два основных метода: 1) 1976г химический (метод Максама-Гилберта) – определ располож нуклеотидов в ДНК
Один из наиболее распространенных методов секвенирования ДНК. Анализируемый фрагмент ДНК метится 32Р с одного конца (3' или 5') и разделяется на четыре аликвоты, в каждой из которых с помощью специфического химического воздействия полинуклеотидная цепь расщепляется по определенным нуклеотидам (Ц; Ц+Т; Г; Г+А); затем образовавшиеся фрагменты разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, что в конечном итоге по авторадиограмме позволяет расшифровывать нуклеотидную последовательность анализируемых фрагментов ДНК. (Нобелевская премия за 1980 г. совместно с Ф. Сенгером и П. Бергом). 2) 1975г – метод разработал Сенгер - ферментативный метод секренирования ДНК (искусственное прерывание репликации ДНК дидезоксинуклеотидами)
Проект «Геном человека» стартовал в 1991г. Самый масштабный и дорогостоящий проект. Цель: полная расшифровка последовательности нуклеотидов ДНК человека (около 3,5 млрд нуклеотидов). Осуществляется усилием двух научных структур: 1. Международный консорциум ученых из разных стран (США, Германия, Япония, Англия, Франция и др.); 2. Частная компания Celera Genomics. Дата завершения проекта 2004 г. Однако, в 2001 г. Было объявлено о расшифровке нуклеотидной последовательности трех человеческих индивидуумов. В настоящее время идет изучение нуклеотидной последовательности с целью применения знаний в медицине и биотехнологии («геном прочитан, но не понят»). Число генов человека – около 30 тыс.
____
Поделитесь с Вашими друзьями: |
