Определение групп крови
В России используется двойное обозначение групп крови — 0(I), А(II), В(III) и AB(IV). Группа крови (фенотип) наследуется по законам генетики и определяется набором генов (генотипом), получаемых с материнской и отцовской хромосомой.
Человек может иметь только те антигены крови, которые имеются у его родителей. Наследование групп крови по системе АВО определяется тремя генами — А, В и О. В каждой хромосоме может быть только один ген, поэтому ребенок получает от родителей только два гена (один от матери, другой от отца), которые и вызывают появление в эритроцитах двух антигенов системы АВО. Антигены крови появляются на 2—3-м месяце внутриутробной жизни и к рождению ребенка хорошо определяются. Естественные антитела выявляются с 3-го месяца после рождения и к 5—10 годам достигают максимального титра.
Принадлежность человека к той или иной группе крови не зависит от возраста, пола, расовой принадлежности. Группа крови передается по наследству в соответствии с законами генетики. Она является индивидуальной биологической особенностью человека, которая определяется уже в раннем периоде эмбрионального развития и не изменяется в течение всей последующей жизни.
Группа крови — это определенное сочетание врожденных антигенных свойств эритроцитов (групповых факторов), содержащихся в клетках крови, и антител к ним, находящихся в плазме (сыворотке).
Вещества, находящиеся в клетках крови, представляют собой антигены (агглютиногены), вызывающие их агглютинацию (склеивание) при встрече и взаимодействии с одноименными антителами, получившими название агглютининов. Агглютиногены клеток крови обозначаются латинскими буквами А и В, агглютинины — соответственно греческими буквами α и β. Это нашло отражение в буквенном обозначении групп крови.
Кровь любого человека может одновременно содержать только противоположные агглютиногены и агглютинины или не иметь каких-то из них. В противном случае должна произойти агглютинация клеток крови.
В зависимости от сочетания агглютиногенов и агглютининов различают четыре группы крови по системе АВ0 — основной и наиболее важной антигенной системе клеток крови человека.
В крови I группы имеется так называемый «нулевой» (0) агглютиноген, агглютиногены А и В отсутствуют. Соответственно в плазме (сыворотке) находятся оба агглютинина — α и β. Полная формула крови I группы — 0αβ(I).
В крови II группы имеются агглютиноген А и противоположный ему агглютинин β. Полная формула II группы крови — Аβ(II).
В крови III группы имеются агглютиноген В и противоположный ему агглютинин α. Полная формула III группы крови — Вα(III).
В крови четвертой группы имеются оба агглютиногена — А и В и отсутствуют агглютинины. Полная формула IV группы крови — AB0(IV).
У 88 % людей с группой крови А(II) определяется разновидность агглютиногена А — А1, а у 12% имеется агглютиноген А2. Они отличаются друг от друга по силе агглютиногенной способности. Значительно сильнее она выражена у разновидности А1. Соответственно, и группа крови AB(IV) также имеет две подгруппы: A1B(IV) и A2B(IV). Разделение на подгруппы имеет большое практическое значение при определении группы крови. Не зная этого, можно ошибочно определить группу крови 0(I) вместо А(II) и В(III) вместо AB(IV). Это связано с тем, что при наличии слабого агглютиногена А2 агглютинация при определении группы крови наступает поздно (иногда через 8—10 мин) и выражена очень слабо.
Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.
Помещение, где проводится определение группы крови, должно быть светлым, с температурой от 15 до 25 °С.
Используются любые белые пластинки (тарелки, пластик) со смачиваемой поверхностью или специальные планшеты. Пластинка маркируется надписью: слева — 0αβ, в центре — Аβ, справа — Вα. На верхнем крае пишется фамилия и инициалы человека, у которого определяется группа крови. Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки соответствующей группы.
При использовании сывороток с титром не ниже 1:64 разрешается для первичного определения группы крови использовать одну серию каждой группы.
При наличии сывороток с меньшим титром используются две серии сывороток каждой группы. Для каждой ампулы сыворотки выделяется отдельная маркированная пипетка, которая после нанесения сыворотки на пластинку сразу же опускается в ту ампулу с сывороткой, из которой была взята.
Кровь для исследования может быть взята из пальца, вены, взвеси эритроцитов, со дна пробирки. Капля крови должна быть примерно в 10 раз меньше капли стандартной сыворотки (соотношение 1:10), с которой она смешивается сухой стеклянной палочкой. Можно пользоваться одной палочкой с оплавленным гладким концом, промывая ее после размешивания каждой капли в стакане с физиологическим раствором и вытирая насухо.
Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови.
После размешивания капель в равномерно красный цвет пластинку покачивают, оставляют на 1 —2 мин в покое, а затем снова периодически покачивают.
Не ранее чем через 3 мин в капли, в которых наступила агглютинация, добавляют по 1 капле (0,05 мл) физиологического раствора NaCl.
Хотя агглютинация начинается в течение первых 10 — 30 с, наблюдение следует продолжать до 5 мин, после чего делается заключение о группе крови.
Реакция гемагглютинации может быть положительной или отрицательной. Положительной реакцией считается наличие агглютинации, отрицательной — ее отсутствие.
При использовании двух серий сывороток результаты в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать. Результаты определений могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций:
1) если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, то исследуемая кровь принадлежит к группе 0(I);
2) если сыворотки групп 0αβ и Вα дали положительную реакцию, то
кровь принадлежит к группе А(II);
3) если сыворотки групп 0αβ и Аβ дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вα — отрицательную, то исследуемая кровь принадлежит к группе В(III);
4) если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, для исключения неспецифической агглютинации необходимо провести дополнительное исследование с сывороткой АВ0. Если Реакция с этой сывороткой также будет отрицательная, то исследуемая кровь относится к группе AB(IV).
Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток приведена в таблице:
Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток
Группа крови
|
0αβ(I) - анти-А+B
|
Aβ (II) - анти-B
|
Bα (III) - анти-A
|
AB0 (IV)
|
0 (I)
|
-
|
-
|
-
|
+
|
А (II)
|
+
|
-
|
+
|
+
|
B (III)
|
+
|
+
|
-
|
+
|
AB (IV)
|
+
|
+
|
+
|
-
|
Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) ее отсутствие.
Ошибки изогемагглютинации.
Невыполнение агглютинации, где она должна быть и наличие агглютинации, где ее быть не должно. Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов.
Наличие агглютинации, где ее быть не должно - это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют "монетные столбики". Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают.
Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в то числе и своей группы крови. К 5-й минуте признаки агглютинации исчезают.
Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении.
Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.
Определение группы крови с помощью моноклональных антител (цоликлонов).
Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови человека системы АВО взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток.
Авидность, то есть время наступления реакции агглютинации и ее выраженность, у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВО-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов.
Цоликлоны не являются клетками человеческих тканей, что исключает возможность инфекционного заражения.
Используются стандартные наборы моноклональных антител высокой специфичности, содержащие реагенты анти-А, анти-В и анти-АВ.
На маркированную пластинку раскапываются в три точки исследуемые эритроциты (0,01—0,03 мл). Рядом с ними помещают реагенты анти-А, анти-В и анти-АВ по одной капле (0,1 мл) в соотношении 2-3:10 Капли перемешивают стеклянной палочкой, пластинку периодически покачивают, ход реакции наблюдают в течение 3 мин.
Определение групп крови системы АВО реагентами цоликлон производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца; в крови, взятой без консерванта. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.
Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15° до +25°С. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную (анти-А или анти-В) пипетку. Определение группы крови системы АВО производится обычными методами на белой фарфоровой или любой другой планшетке со смачиваемой поверхностью.
Высокая активность и авидность реагентов цоликлон позволяет применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В.
Оценка результата проводится по наличию агглютинации эритроцитов с соответствующим реагентом.
-При агглютинации во всех трех каплях определяется группа крови AB(IV).
-При агглютинации с анти-А и анти-АВ определяется группа крови А(II).
-При агглютинации с анти-В и анти-АВ определяется группа крови В(III).
-При отсутствии агглютинации во всех трех каплях определяется группа крови 0(I).
Оценка результатов определения групп крови при помощи цоликлонов приведена в таблице:
Группа крови
|
Анти-A
|
Анти-B
|
Анти-АВ
|
0(I)
|
-
|
-
|
-
|
A(II)
|
+
|
-
|
+
|
B(III)
|
-
|
+
|
+
|
AB(IV)
|
+
|
+
|
+
|
Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) ее отсутствие.
При наличии агглютинации со всеми тремя реагентами необходимо исключить неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого к капле эритроцитов вместо цоликлонов добавляют каплю физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.
С приказом МЗ РФ №363 «Об утверждении инструкции по применению компонентов крови» в полном объеме можно ознакомиться на сайте АГМА в папке «Определение групп крови – трансфузиология»
| 
