Исследование проводилось в клинико-диагностической лаборатории гбуз «Специализированная клиническая инфекционная больница»

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

(ФГБОУ ВПО «КубГУ»)

Кафедра биохимии и физиологии

ДОПУСТИТЬ К ЗАЩИТЕ В ГАК

Заведующий кафедрой – канд. биол.

наук, доцент ________ В. В. Хаблюк

«___»______________ 2015 г.

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА

БАКАЛАВРА

ИЗМЕНЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ

ИНФЕКЦИОННОМ МОНОНУКЛЕОЗЕ, ОСЛОЖНЕННОГО ВИРУСОМ ЭБШТЕЙН-БАРРА

Работу выполнил _____________________________________ М.М. Дьячкова

(подпись, дата)

Факультет биологический

Направление 06.03.01 Биология

Научный руководитель,

доцент, канд. биол. наук _______________________________ Н.Н. Улитина

(подпись, дата)

Нормоконтролёр,

зав. кафедрой, канд. биол.

наук, доцент _________________________________________ В.В. Хаблюк

(подпись, дата)

Краснодар 2015

РЕФЕРАТ

ИНФЕКЦИОННЫЙ МОНОНУКЛЕОЗ, ВИРУС ЭБШТЕЙН-БАРРА, АТИПИЧНЫЕ МОНОНУКЛЕАРЫ, АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗА, АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗА, БИЛИРУБИН

Исследование проводилось в клинико-диагностической лаборатории ГБУЗ «Специализированная клиническая инфекционная больница». Количество обследованных с инфекционным мононуклеозом, осложненным вирусом Эбштейн-Барра, составило 40 человек.

Целью работы являлось определение динамики биохимических показателей при данном заболевании.

Для достижения поставленной цели проводились такие исследования, как: биохимические исследования (АЛТ, АСТ, ЛДГ, билирубин), гематологические исследования и проведение эксперсс-теста для выявления гетерофильных антител.

СОДЕРЖАНИЕ

Ведение …………………………………………………………….………… 5

1 Аналитический обзор ………………………………………...……….…… 7

1.1 Этиология и патогенез инфекционного мононуклеоза ………………… 7

1.2 Классификация инфекционного мононуклеоза ………………….……… 9

1.3 Роль биохимических показателей в диагностике мононуклеоза ..……… 11

2 Материал и методы исследования ………………………………..………… 14

2.1 Материал исследования ………………………………………………… 14

2.1.1 Характеристика контингента ……………………………………… 14

2.1.2 Характеристика материала ………………………………………… 14

2.2 Методы исследования …………………………………………...……… 14

2.3 Статистическая обработка данных ……………………………………… 20

3 Изменение биохимических показателей при инфекционном мононуклеозе, осложненного вирусом Эбштейн-Барра ……………………...….………… 21

3.1 Распределение контингента ……………………………………….…… 21

3.2 Динамика изменения гематологических показателей ……………..…… 22

3.3 Динамика изменения биохимических показателей ……….…………… 27

3.4 Экспресс-тест латекс агглютинации для выявления гетерофильных антител при мононуклеозе …………………………………….………… 34

Заключение ………………………………………………………..………… 35

Список использованных источников ……………………………………..… 36

Приложение А Изменение гематологических показателей ………………….... 39

Приложение Б Изменение биохимических показателей ……………..……… 40

ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ОБОЗНАЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

ИМ – инфекционный мононуклеоз

ВЭБ – вирус Эбштейн-Барра

АМ – атипичные мононуклеары

ВПГ – вирус простого герпеса

АЛТ – аланинаминотрансфераза

АСТ – аспартатаминотрансфераза

ЛДГ – лактатдегидрогеназа

ВВЕДЕНИЕ
Инфекционный мононуклеоз является одним из вариантов инфекции, вызванной вирусом Эбштейна-Барр, при котором вовлечение в патологический процесс таких органов, как печень и селезенка, достигает 90% [Хмилевская, Зайцева, Михайлова, 2009]. Ряд авторов поражение печени считают обязательным компонентом клинической картины инфекционного мононуклеоза, а к осложнениям относят гепатит, протекающий с выраженной желтухой.

В последние годы отмечается рост заболеваемости ИМ, что связано как c истинным его увеличением, так и улучшением диагностики в связи с ассоциацией ИМ с ВИЧ-инфекцией [Куртасова, Голованова, 2007].

Актуальность проблемы обусловлена высокой инфицированностью взрослого и детского населения планеты герпесвирусами [Шаимбетов, Мамбетова, Кадырова, 2012]. Широкий тканевой тропизм, способность к персистенции в организме инфицированного человека являются уникальными биологическими свойствами всех герпесвирусов [Хмилевская, 2010]. В настоящее время с помощью молекулярно генетического и серологического исследований установлено, что мононуклеозоподобный синдром может быть вызван не только ВЭБ, но и другими возбудителями [Боровская, Маркелова,Скляр, 2010].

По данным исследователей, вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) признан наиболее частым этиологическим агентом инфекционного мононуклеоза, который относится к семейству Herpesviridae, подсемейству Gammaherpesviridae, роду Lymphocryptovirus [Шарипова, Бабаченко, 2013].

Инфицированность вирусом Эпштейна-Барр к 40 годам превышает 90% населения, 50% населения переносит инфекционный мононуклеоз в детском и подростковом возрасте. В развитых странах инфицирование в основном происходит в подростковом и молодом возрасте – в 15-19 лет. Наиболее тяжелое течение ВЭБ-инфекции наблюдается у лиц старше 24 лет [Инфекционный мононуклеоз…, 2010].

Однако многообразие этиологических агентов и длительный латентный период (может продолжаться до 30-45 дней) создает трудности для дифференциальной диагностики на ранних этапах заболевания [Уразова,1989]. Клинические проявления ИМ зависят так же и от возраста пациентов. Начало заболевания может быть острым (60–70%) или постепенным.

На данный момент наиболее распространенными и информативными методами диагностики мононуклеоза являются клинические и гематологические.

Основными проявлениями инфекционного мононуклеоза служат изменения в периферической крови, которые возникают в первые дни болезни и достигают максимума в ее разгар. Самым характерным признаком инфекционного мононуклеоза является наличие атипичных мононуклеаров, которые появляются в разгар болезни и сохраняются две-три недели. Хотя известны множественные случаи протекания атипичной формы мононуклеоза, когда в крови не обнаруживаются атипичные мононуклеары [Камарь, Карпухина,2011]. В старшей возрастной группе чаще, чем у подростков, отмечено позднее появление в крови атипичных мононуклеаров, что усложняет диагностику [К вопросу клиники…, 2002]. Кроме ИМ вирус Эбштен-Барра вызывает злокачественные новообразования, являющиеся самостоятельными нозологическими формами. К таким болезням относят лимфома Беркитта и назофарингеальная карцинома [Семенов, 2008].

Целью работы являлось определение динамики биохимических показателей при данном заболевании.

В связи с поставленной целью, решались следующие задачи:

1) проводился сравнительный анализ полученных данных внутри групп и с референсными значениями с целью определения общей динамики биохимических показателей;

2) проводилось сравнение биохимические показателей между группами для определения связи динамики показателей с полом;

3) выяснялась относительная диагностическая значимость биохимических показателей.

1 Аналитический обзор

ДНК-содержащий вирус Эбштейна-Барр сферической формы диаметром 120-150 нм относится к ϒ-герпесвирусам (вирус герпеса человека 4-го типа) (таблица 1).

Морфологически он не отличается от вируса простого герпеса [Семенов, 2008]. Имеет сложную антигенную структуру, содержит: ядерный антиген (EB

NA) и ранний поверхностный антиген (EB-EA) – показатели острой фазы, вирусный капсидный антиген (EB-ECA) и мембранный антиген (EB-MA) – показатели латентной инфекции [Бережнова, 2007]. В отличие от других герпетических вирусов он вызывает пролиферацию пораженных клеток, то есть имеет онкогенную активность. В условиях угнетения Т-клеточного звена иммунитета может пожизненно персистировать в организме человека, обладает тропизмом к В-лимфоцитам [Ющук, Венгеров, 2011; Семенов, 2008].

Герпесвирусы, наряду с ретровирусами, вирусами гепатитов B, C, D, ВИЧ, полиомиелита и ECHO, кори, краснухи, некоторых форм гриппа, аденовирусами, относят к возбудителям медленных вирусных инфекций человека, для которых характерен продолжительный инкубационный период и медленно прогрессирующий характер течения [Арова, Камарь, Карпухина, 2012].

Воротами инфекции является рото- и носоглотка, реже слизистые ЖКТ [Бережнова, 2007]. ВЭБ обладает тропизмом к различным клеткам, но основной мишенью для него являются В-лимфоциты и дендритные клетки, несущие на себе рецепторы CD21 (или CR2 – рецептор для C3d компонента системы комплемента). Кроме В-лимфоцитов, могут поражаться Т-лимфоциты и NK-клетки, моноциты (макрофаги), нейтрофилы, эпителий слизистой носоглотки и протоков слюнных желез. Важной особенностью ВЭБ является его способность удлинять жизнь В-лимфоцитам, инфицированных ВЭБ,за счет подавления их естественного апоптоза [Орлова, Машин, Варникова, 2009].

Первичная репликация вируса происходит в эпителии слизистой оболочки ротоглотки и носоглотки, протоков слюнных желез, а также в лимфоидных образованиях. В процессе репликации вируса экспрессируется свыше 70 различных вирусспецифических белков. Затем происходит гематогенная и лимфогенная диссеминация вируса, то есть попадание вируса в периферические лимфатические узлы, печень, селезенку и другие органы, содержащие лимфоретикулярную ткань [Семенов, 2008]. При этом в первую очередь инфицируются В-лимфоциты, которые начинают под влиянием антигенов вируса интенсивно пролиферировать, трансформируясь в плазматические клетки [Ющук, Венгеров, 2011; Семенов, 2008]. Пролиферация В-лимфоцитов приводит к активации Т-супрессоров, которые подавляют пролиферацию В-лимфоиитов. Молодые формы Т-лимфоцитов циркулируют в крови, они часто имеют вид атипичных широкоплазменных мононуклеаров, что служит важнейшим гематологическим признаком инфекционного мононуклеоза. Пролиферация В-лимфоцитов подавляется также естественными киллерами и путем антителзависимого цитолиза [Бережнова, 2007]. В результате гибели инфицированных лимфоцитов вирус высвобождается и инактивируется антителами. Наступает выздоровление, однако часть инфицированных В-лимфоцитов сохраняется, и вирус персистирует в них пожизненно. Под влиянием различных факторов возможна реактивация вируса (хроническая форма Эбштейна-Барр вирусной инфекции) [Горохова, Сараева, 2005].

Таким образом, происходит активация В-лимфоцитов, которая индуцирет экспрессию вирусного гена BСRF-1, который является гомологом ИЛ-10 (белка BСRF-1), в свою очередь, последний стимулирует пролиферациюЭБВ-инфицированных клеток [Разгуляева, Уханова, 2012].

При Т-клеточном иммунодефиците возможны реактивация ВЭБ, возникновение В-клеточных лимфом с иммунодефицитом и реактивацией ВЭБ связывают также развитие лимфомы Беркитта и носоглоточной карциномы [Разгуляева, Уханова, Безроднова, 2012].
1.2 Классификация инфекционного мононуклеоза
Международная классификация:

В 27. – инфекционный мононуклеоз:

В 27.0. – мононуклеоз, вызванный гамма-герпетическим вирусом (ВЭБ);

В 27.1. – цитомегаловирусный мононуклеоз;

В 27.8. – другой инфекционный мононуклеоз;

В 27.9. – инфекционный мононуклеоз неуточненный.

Клиническая классификация инфекционного мононуклеоза:

-по типу (типичный, атипичный – бессимптомный, стертый, висцеральный)

-по тяжести (легкая форма, среднетяжелая форма, тяжелая форма)

-по характеру течения (гладкое, негладкое – с осложнениями, с наслоением вторичной инфекции, с обострением хронических заболеваний, с рецидивами)

-по длительности течения (острое, затяжное, хроническое) [Бабаченко, 2010; Гурцевич, 2003].

В типичном случае острый инфекционный мононуклеоз характеризуется доброкачественным циклическим течением и наличием симптомокомплекса, характерного для этого заболевания, а также гематологическими изменениями в периферической крови (лимфомоноцитоз на фоне лейкоцитоза и атипичные мононуклеары в количестве 10% и более). Типичное течение инфекционного мононуклеоза чаще отмечается у пациентов в возрасте от 15 до 22 [Кинзерская, Ратников, Рухтина, 2012].

К атипичным формам инфекционного мононуклеоза относятся:

-стертая форма: протекает со слабо выраженными и быстро проходящими симптомами или под маской острых респираторных заболеваний диагностируется преимущественно в эпидемических очагах;

- бессимптомная форма: протекает с отсутствием клинических симптомов; болезни, диагностируется на основании обследования гематологическими, серологическими методами и методом эпидемиологического анализа;

- висцеральная форма: отличается тяжелым течением с полиорганным поражением, с вовлечением сердечнососудистой, центральной и периферической нервной систем, почек, надпочечников и других жизненно важных органов [Иванова, 2001; Егорова, 2003].

У большинства заболевших в возрасте 25 лет и старше наблюдается атипичное течение болезни с преобладанием каткрально-респираторного и интоксикационного синдромов [Кинзерская, Ратников, Рухтина, 2012].

Инфекционный мононуклеоз имеет острое (до трех месяцев), затяжное (три-шесть месяцев), хроническое (более шести месяцев), а также рецидивирующее течение. Клинические проявления в течение полугода и более после предшествующего инфекционного мононуклеоза в виде персистирующей или возвратной лихорадки, немотивированной утомляемости, фарингита, лимфаденита, гепатита, головной боли, депрессии без признаков ревматологических, онкологических и других заболеваний расцениваются как хронический инфекционный мононуклеоз [Иванова,2001; Егорова, 2003]. Рецидивом инфекционного мононуклеоза считается возврат клинических симптомов болезни через 1 месяц и более после перенесенного заболевания [Бабаченко, 2010].