Идентификация бактерий по ферментативной активности.
Для индентификации бактерий-аэробов по ФА используют среды Гисса с углеводами. Под действием образующейся при расщеплении углевода кислоты индикатор (добавленный заранее) меняет цвет среды с жёлтого на красный. При этом Mb может расщеплять углевод до кислоты и газа, а может только до кислоты. Наличие газа устанавливают по скоплению его пузырьков в поплавке на жидких средах или разделению агарной среды воздухом в твёрдых средах.
В зависимости от результата (изменение окраса раствора обозначается К+, что означает "кислота"; накопление газа в поплавке обозначают Г+, что означает "газ". В отрицательных случаях обозначают К-, Г-):
Mb, расщепляющий сахар до кислоты (КС) и газа, биохимически активен (К+, Г+)
Mb, расщепляющий сахар до КС, неактивен (К+, Г-)
Mb, не расщепляющий сахар, инертен (К-, Г-)
Для протеолитической активности используют среды с желатином, молоком и пептоном. При использовании последней при расщеплении выделяются индол, аммиак и сероводород. Их выделение определяют с помощью установленных заранее индикаторов, которые меняют цвет при выделении этих газов. (Индол – покраснение, аммиак – посинение, сероводород – почернение).
Вывод: сахаро- и протеолитическая активность – диагностический признак для определения рода и вида.
Также изучают каталазную активность Mb.
На предметное стекло наносят 3% раствор H2O2 и добавляют исследуемую культуру, после чего наблюдают результат разложение H2O2 до H2O и O2.
Вывод: каталазная активность определяет тип дыхания. При положительном результате в исследуемой культуре мы утверждаем о том, что это аэробы или факультативные анаэробы.
Для идентификации бактерий-анаэробов по ФА используют 3 среды:
1) ДДС – Вильсона-Блера для идентификации возбудителя газовой гангрены
На этой среде изучают сахаролитическую активность. В состав среды входит глюкоза, сульфат натрия, хлористое железо. Анаэробы восстанавливают сульфат натрия до его сульфида, после чего Na2S+FeCl22NaCl+FeS (чёрный осадок). При расщеплении глюкоза образуется газ.
2) ДДС – молоко (возб. газовой гангрены). В состав молока входят белок и молочный сахар лактоза.
Опыт 1 сбраживание молока с образованием сгустка (сахаролитические свойства)
Опыт 2 пептонизация молока с образованием губчатого сгустка и молочной сыворотки (протеолитические свойства).
3) Среда Цейсслера (кровяно-сахарный агар). Анаэробы обладают гемолитической активностью, они разрушают эритроциты, поэтому вокруг колоний образуется зона просветления.
Методы культивирования риккетсий и вирусов.
Для культивирования риккетсий и вирусов питательные среды не используются. Используются только биологические модели.
1) Куриный эмбрион – заражение проводят на хорион-аллантоис, желточный мешок или амнион. Признаки репродукции проявляются особенно чётко в месте заражения на хоорионаллантоисной оболочке в виде очагов поражения и геморрагий.
2) Культура клеток (тканей) – репродукция в культуре клеток сопровождается цитопатическим действием, которое проявляется в изменении морфологии клеток и их гибели. Характер и время проявления ЦПД зависит от вида Mb.
3) Лабораторные животные – репродукция сопровождается клиническими проявления болезни или гибелью животного.
Поделитесь с Вашими друзьями: |