ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ
Микроорганизмы (за исключением облигатных внутриклеточных паразитов — риккетсий, хламидий, вирусов, а также простейших) культивируют, как правило, на искусственных питательных средах, которые должны содержать соответствующие исходные вещества, необходимые для пластического и энергетического метаболизмаи факторы роста., т.е. быть полноценными. Выделение микроорганизмов из различных патологических материалов, полученных от больного человека, широко используется в лабораторной практике для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, в научноисследовательской работе, а также при производстве вакцин, антибиотиков и других биологически активных продуктов микробной жизнедеятельности. Большинство патогенных и условно-патогенных микробов выращивают на питательных средах при температуре 37°С в течение 1-2 сут. Однако некоторые из них нуждаются в более длительных сроках. Например, бактерии коклюша — в 2-4 суток, а микобактерии туберкулеза — в 3-4 недели. В клинической бактериологической диагностике идентификацию проводят только «чистых культур» бактерий, выделенных из исследуемого материала, полученного от больного. С этой целью используют свежеприготовленные, искусственные питательные среды, предварительно разлитые в чашки Петри. Выбор питательной среды для выделения чистой культуры возбудителей имеет важнейшее значение в бактериологической диагностике. Для первичного посева обычно применяют комплекс сред, включающий среды обогащения, элективные среды, среды с повышенной питательной ценностью для трудно культивируемых 7 микроорганизмов и дифференциально-диагностические питательные среды. При идентификации культур проводят определение их родовой и видовой принадлежности, а при необходимости и внутривидовое типирование. Результат получают по совокупности данных: 1. морфологических, основанных на выявлении характерных особенностей ультраструктуры возбудителя и их тинкториальных свойств (чаще окраска по Граму); 2. кулътуральных, основанных на выделении чистой культуры микроорганизмов на плотной питательной среде, с изучением особенностей выросших колоний; 3. биохимической активности культур. В том числе: оксидазной и каталазной активности, способности ферментировать углеводы (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, маннит и др.), образовывать индол, аммиак и сероводород, являющиеся продуктами протеолитической активности бактерий. Реже используются тесты ассимиляции азота, определение уреазной активности и активности отдельных специфических ферментов; 4. иммунологических, основанных на выявлении антигенов (АГ) возбудителя или антител (АТ) к ним. Идентификацию возбудителей по их антигенным свойствам проводят в реакциях ориентировочной агглютинации, ко-агглютинации, латексной агглютинации, преципитации или иммунофлюоресценции (прямой или непрямой). Антитела к возбудителю определяют в серологических реакциях: развернутой реакции агглютинации, непрямой агглютинации, преципитации, связывания комплемента, иммуноферментном и радиоиммунном методах и др.; 4. молекулярно- генетических, основанных на определении специфичных нуклеотидных последовательностей в цепи ДНК при помощи короткой эталонной цепи ДНК (праймера). С этой целью используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР), лигазную цепную реакцию и их модификации, метод генетических зондов, сэндвич-гибридизацию и др.