«лпвп-холестерин-uts» Набор реагентов «лпвп-холестерин-uts»

Скачать 70 Kb.

Дата	03.10.2017
Размер	70 Kb.
Тип	Инструкция

Инструкция

по применению набора реагентов для количественного определения холестерина липопротеинов высокой плотности в сыворотке и плазме крови человека

«ЛПВП-ХОЛЕСТЕРИН-UTS»

Набор реагентов «ЛПВП-ХОЛЕСТЕРИН-UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.

Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05462

Информация для заказа набора «ЛПВП-ХОЛЕСТЕРИН-UTS»

Кат. №	Комплектация	Количество определений
ЛПВП-015-09-120	Р1 (90 мл) + Р2 (30 мл) + калибратор (лиофилизат) 1 флакон	120/v

где v – объем фотометрической ячейки анализатора.

1. НАЗНАЧЕНИЕ

1.1. Набор реагентов «ЛПВП–ХОЛЕСТЕРИН-UTS» предназначен для определения холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП-холестерина) в сыворотке или плазме крови человека ферментативным методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.

1.2. ЛПВП-холестерин в крови осуществляет транспорт липидов, включая холестерин от клеток периферических органов в печень, где холестерин переводится в желчные кислоты и выводятся из организма. ЛПВП-холестерин известен как «хороший холестерин», поскольку высокий уровень его содержания снижает риск сердечных заболеваний. Низкое содержание ЛПВП-холестерина считается фактором высокого риска для возникновения сердечных заболеваний. Снижение концентрации ЛПВП-холестерина в плазме крови человека является показателем склонности к атеросклеротическим болезням, инфаркту миокарда, инсульту. На этом основано клиническое значение анализа.

1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.

2. ПРИНЦИП МЕТОДА

2.1. Набор основан на прямом методе определения в исследуемом образце ЛПВП-холестерина, без стадий осаждения и центрифугирования. Метод определения ЛПВП-холестерина основан на способности ряда детергентов переводить ЛПВП-холестерин в растворимое состояние, что позволяет ему вступать в реакции с холестеринэстеразой, холестериноксидазой и хромогенами в водной среде, то время как липопротеины низкой плотности, липопротеины очень низкой плотности и хиломикроны не вступают в реакции с этими ферментами из-за образования конгломератов на поверхности детергента. ЛПВП-холестерин определяется с помощью следующих реакций [1,2,3]:

Эфиры-Холестерина + H₂O ^{Холестеринэстераза} Холестерин + Жирные кислоты (1)

Холестерин + О₂ ^{Холестериноксидаза} 4-Холестенон + Н₂О₂ (2)

2Н₂О₂+ TODB + 4 – Аминоантипирин ^{Пероксидаза} Хинонимин + 5Н₂О (3)

2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии поглощения при длине волны 600 нм молекулами хинонимина, продукта реакции (3). Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски хинонимина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации ЛПВП-холестерина в пробе.

3. СОСТАВ НАБОРА

3.1. Набор реагентов «ЛПВП-ХОЛЕСТЕРИН – UTS» поставляется в виде двух растворов: Реагента 1, Реагента 2 и лиофилизированного калибратора.

Компоненты и их состав:

Наименование	Состав
Реагент 1 (Р1) Ферментный раствор, pH 6,5	Буфер Гуда
	Поливинилсульфоновая кислота
	TODB N,N-бис(4-сульфобутил)-3-метилаланин
	Полиэтилен-гликоль-метиловый эфир
	Хлористый магний
	Детергент EDTA
Реагент 2 (Р2) Ферментно-субстратный раствор, pH 6,5	Буфер Гуда
	Холестеринэстераза
	Холестериноксидаза
	Пероксидаза
	4-Аминоантипирин
	Детергент
Калибратор ЛПВП-холестерина	Лиофилизат сыворотки крови человека концентрация указана на этикетке флакона

4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

4.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации холестерина в диапазоне от 0,07

до 4,65 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 5,0%.

4.2. Чувствительность определения – не более 0,07 ммоль/л.

4.3. Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.

4.4. Фактор пересчета: 1 ммоль/л = 1мг/100мл × 0,02586.

4.5. Величины концентрации ЛПВП-холестерина в сыворотке или плазме взрослого человека [3]:

Степень риска сердечных заболеваний	Мужчины	Женщины
Низкая	>1,3 ммоль/л	>1,55 ммоль/л
Средняя	0,90 - 1,3 ммоль/л	1,16 – 1,55 ммоль/л
Высокая	<0,90 ммоль/л	<1,16 ммоль/л

4.6. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение концентрации холестерина, приведены в обзоре [5].

5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

5.1. Реагент 1 и Реагент 2 содержат детергенты, реагент 2 содержит 4-аминоантипирин. Следует избегать попадания этих реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.

5.2. Набор содержит калибратор на основе человеческой сыворотки. Используемые донорские сыворотки были предварительно проверены на отсутствие HbsAg и антител против HIV 1+2 и HCV. Тем не менее, следует обращаться с калибратором с теми же мерами предосторожности, как с образцами пациентов.

5.3. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

5.4. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

6.1. Для выполнения анализа по определению концентрации ЛПВП-холестерина с применением набора реагентов «ЛПВП-ХОЛЕСТЕРИН–UTS» рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие выполнять измерение оптической плотности при длине 580 (530-600) нм (режим фиксированного времени), и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ^ОС.

6.2. Общелабораторное оборудование.

7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

7.1. Сыворотка или (гепаринизированная, ЭДТА) плазма крови без следов гемолиза.

7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее 2 ч после взятия крови.

7.3. Анализ на ЛПВП-холестерин рекомендуется проводить сразу после отбора крови.

7.4. Образцы сыворотки или плазмы, для проведения анализа на содержание ЛПВП-холестерина, стабильны не более 7-х суток при +(2-8) ^ОС [3].

7.5. Замораживание и оттаивание образцов сыворотки и плазмы крови не рекомендуется.

8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

8.1. Реагенты 1 и 2 готовы к использованию. Перед применением следует прогревать до комнатной температуры и тщательно перемешивать калибратор, контрольные сыворотки и пробы

8.2. Приготовление раствора калибратора: в содержимое флакона добавить 1 мл дистиллированной воды, закрыть крышкой, перемешать до полного растворения, избегая вспенивания.

Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.

8.3. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:

Добавить в кюветы:	Анализируемый образец, мкл	Калибровочная проба, мкл	Холостая проба, мкл
Р1	300	300	300
Калибратор	-	4	-
Сыворотка или плазма крови	4	-	-
Пробы перемешать и инкубировать при температуре + (37±0,5) ^ОС в течение 5 минут. Добавить в кюветы:
Р2	100	100	100

8.4. Пробы тщательно перемешать и инкубировать при температуре +(37±0,5) ^ОС строго 5 минут

8.5. Измерить оптическую плотность анализируемого образца (Аобр) и калибровочной пробы (Акал) против холостой пробы при длине волны 580 (530-600) нм.

Концентрацию ЛПВП-холестерина в сыворотке крови или плазме (ммоль/л) определить по формуле:

где: С – концентрация ЛПВП -холестерина в анализируемом образце сыворотки или плазмы крови;

C_кал – концентрация ЛПВП-холестерина в калибраторе (указана на этикетке флакона), ммоль/л.

8.6. Если полученная концентрация холестерина в образце выше 4,65 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.

8.7. Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:

8.7.1. Установить программу определения концентрации ЛПВП-холестерина согласно таблице:

Наименование параметра	Значение
Метод измерения	Фиксированное время
Длина волны, нм	580 (530-600)
Измерение против	Дист. вода
Температура реакции	37 ^ОС
Единица измерения	ммоль/л
Число знаков после запятой	2
Изменение оптической плотности	Увеличивается
Соотношение Реагент 1/проба/Реагент 2	75:1:25
Концентрация калибратора, ммоль/л	Указана на флаконе
Время преинкубации (Реагент 1 + проба), мин	5
Время реакции (с Реагентом 2), мин	5
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.	0,2
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот.	0
Границы линейности, ммоль/л	0,07 до 4,65
Нормы в сыворотке, не менее, ммоль/л	2,28*
Минимум нормы, ммоль/л	0,78*

*- Величины концентрации ЛПВП-холестерина в сыворотке или плазме мужчин.

8.7.2. При первом использовании набора, а также при получении новой серии необходимо провести калибровку с использованием входящего в состав набора калибратора ЛПВП-холестерина.

8.7.3. Концентрация ЛПВП-холестерина в образце рассчитывается в ммоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и сохраненной в памяти биохимического анализатора.

8.7.4. Если полученная концентрация ЛПВП-холестерина в образце выше 3,88 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.

9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

9.1. Набор реагентов «ЛПВП-ХОЛЕСТЕРИН–UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 ^ОС в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25 ^ОС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.

9.2. Срок годности набора указан на упаковке.

9.3. Реагенты 1 и 2 после вскрытия флакона могут храниться при температуре +2..+8 ^ОС в защищенном от света месте в течение всего срока годности в плотно закрытом флаконе.

9.4. Раствор калибратора после приготовления стабилен 7 дней при 2-8 ^ОС или 1 месяц при –20 ^ОС. Повторное замораживание раствора калибратора после оттаивания не допускается.

9.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы

Kaplan A et al. Lipoprotein. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St. Louis. Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437
US National Cholesterol Education Program of the National Institutesof Health.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.

Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».

По вопросам, касающимся качества набора «ЛПВП-ХОЛЕСТЕРИН–UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31,

Факс: (495) 564-86-41.

E-mail: office@unimedao.ru; https://www.unimedao.ru

Каталог: files -> catalog
catalog -> «гармония» ООО
catalog -> Обзор клинической литературы по применению препарата Maxgraft ®/ C+tba разрешение к применению
catalog -> «Фельдзаатен Фройденбергер» Германия
catalog -> Название проекта / инновационной идеи
catalog -> Экзаменационные вопросы и перечень практических манипуляций
catalog -> 12 законов успешных переговоров
catalog -> Получение высококачественного изображения с помощью линз volk

Скачать 70 Kb.

Поделитесь с Вашими друзьями: