2. 4 основные закономерности размножения и роста культур микроорганизмов

1 Микроорганизмы, используемые в бродильных производствах

2 Стадии развития культур микроорганизмов

3 Способы культивирования микроорганизмов

4 Факторы, влияющие на рост и размножение микроорганизмов

5 Обмен веществ микроорганизмов

6 Транспорт веществ в клетку

7 Производственная инфекция и способы дезинфекции

1 Микроорганизмы, используемые в бродильных производствах

В бродильных производствах используют следующие группы микроорганизмов: бактерии, дрожжи и плесневые грибы.

Дрожжи __ простейшие одноклеточные микроорганизмы. Относятся к эукариотам, т.е. имеют в клетке оформленное ядро. Дрожжи классифицируют в зависимости от способа размножения.

Основное значение в промышленности имеет класс спорогенных грибов __ Ascomycetes (аскомицетов). Представляют истинные грибы, способные размножаться как вегетативным (почкование, деление), так и половым (с помощью спор) путем. Главным признаком дрожжей является способность образовывать споры. Дрожжи используют в производстве спирта, пива, вина, кваса.

Класс дрожжеподобных (несовершенных) грибов размножается только почкованием и спор не образует. Дрожжеподобные грибы (Candida, Torulopsis, Brettanomyces) являются вредителями производства.

Бактерии __ одноклеточные микроорганизмы, не содержащие хлорофилла. Относятся к прокариотам, так как в своей клетке не имеют митохондрий и четко оформленного ядра (данную роль выполняет нуклеотид). Размер бактериальных клеток значительно меньше дрожжевых. По форме бактерии можно разделить на три группы: шаровидные, палочковидные и извитые. Размножаются бактерии путем бинарного деления с образованием двух одинаковых клеток. Некоторые палочковидные бактерии (бациллы) способны образовывать споры.

Бактерии являются возбудителями молочнокислого, уксуснокислого, маслянокислого брожения. Используются в качестве продуцентов для получения ферментных препаратов. В бродильной промышленности молочнокислые бактерии применяют совместно с дрожжами в производстве кваса и в виноделии для яблочно-молочнокислого брожения.

Плесневые грибы (микромицеты). Относятся к низшим споровым растениям, к грибам. Являются эукариотами. Используют различные органические соединения для построения рыхлых, войлочных или паутинистых, бесцветных или окрашенных нитей __ гифов мицелиальной грибницы. Размножаются грибы различными способами: вегетативным (кусочком мицелия), бесполым с образованием спор (спорангиоспор или конидиоспор), половым с образованием аск или базидий.

Плесневые грибы применяют в качестве продуцентов ферментов. Однако в большинстве случаев при производстве продуктов брожения плесневые грибы вызывают порчу.

2 Стадии развития культур микроорганизмов

Для использования жизнедеятельности микроорганизмов в том или ином производстве необходимо знать их свойства, в том числе закономерности роста и развития.

Рост клетки - увеличение ее размеров и массы в результате биосинтетических процессов. Развитие культуры - изменение морфологических и физиологических ее свойств в процессе прохождения жизненного цикла.

При внесении микроорганизмов в питательную среду они обычно растут до тех пор, пока содержание питательных веществ не достигнет минимума, после чего рост прекращается. Процесс роста и размножения микроорганизмов в такой системе описывается кривой роста (рис.6), которая имеет S-образную форму.

1 - лаг фаза (фаза адаптации). Внесенные в питательную среду клетки микроорганизмов приспосабливаются к условиям и составу среды, размножения практически не происходит. Продолжительность этой фазы (может длиться от нескольких часов до нескольких суток) зависит от состава питательной среды, рН, температуры, возраста и количества внесенных клеток

П - логарифмическая или экспоненциальная фаза роста. Это стадия интенсивного размножения. Скорость размножения максимальна. В этой фазе большинство клеток является биологически активными и молодыми. Если культуру в данной фазе развития перенести в другую емкость с аналогичным субстратом, то скорость роста микроорганизмов не изменится. В этом случае лаг-фаза отсутствует. Если же пересев происходит во время другой стадии, то фаза адаптации обязательно будет присутствовать.

Клетки по размеру мелкие, так как почкование опережает рост, но большая поверхность таких клеток обеспечивает высокую скорость биохимических процессов. В то же время на этой стадии культура более чувствительна к действию неблагоприятных факторов.

Ш фаза - замедленного роста. Скорость размножения замедляется, так как постепенно изменяется состав среды: снижается концентрация питательных веществ, увеличивается плотность культуры в единице объема, накапливаются продукты обмена веществ клеток, которые в определенной концентрации могут угнетать нормальную жизнедеятельность культуры микроорганизмов.

IV фаза - стационарная. Наступает, когда концентрация клеток перестает увеличиваться и число их в единице объема становится максимальным. Скорость размножения равна скорости отмирания. В этот период в результате жизнедеятельности клеток в культуральной среде накапливаются продукты обмена веществ, которые имеют важное практическое значение (ферменты, антибиотики и др.).

V фаза - отмирания. Это период, когда в результате

истощения питательной среды и максимального накопления

продуктов обмена скорость отмирания клеток намного

превышает скорость их размножения. Происходит автолиз - распад белков мертвых клеток под действием собственных ферментов.

Фаза отмирания является противоположностью логарифмической фазы роста.

3 Способы культивирования микроорганизмов

Для культивирования микроорганизмов применяют поверхностный или глубинный способы.

При поверхностном способе микроорганизмы выращивают чаще всего на твердых (рыхлых, увлажненных до 30-80%, например, отрубях) или жидких (реже) питательных средах. В первом случае рост идет на поверхности твердых частиц и в порах, заполненных водой или воздухом, перемешивание отсутствует. Если среда жидкая, то кюветы с ней помещают в вентилируемые воздухом камеры. Культура микроорганизмов потребляет кислород непосредственно из газовой фазы __ воздуха.

Поверхностным способом выращивают аэробные микроорганизмы (например, плесневые грибы).

Глубинный способ характеризуется тем, что микроорганизмы развиваются во всей толще жидкой питательной среды в специальных аппаратах (ферментаторах). Метод применим как для выращивания аэробных (аэрация среды обязательна), так и анаэробных микроорганизмов. Во всех случаях проводят перемешивание питательной среды мешалками.

Культивирование глубинным способом может быть периодическим или непрерывным.

Сущность периодического способа заключается в том, что весь объем питательной среды загружают в аппарат сразу, добавляют культуру микроорганизмов и при оптимальных условиях ведут процесс до тех пор, пока не накопится нужное количество биомассы (например, при выращивании чистой культуры дрожжей, бактерий; в производстве хлебопекарных дрожжей) или продуктов жизнедеятельности микроорганизмов - метаболитов (например, спирта).

При периодическом культивировании изменяется состав среды (уменьшается концентрация питательных веществ и увеличивается количество метаболитов); скорость роста; морфологические и физиологические свойства культуры. К тому же возникают технологические трудности __ циклический ход операций, сменные технологические режимы, что затрудняет контроль и автоматизацию процесса. Эффективность данного способа низкая (70% времени приходится на непроизводительные стадии __ лаг-фазу и фазу отмирания).

Эти недостатки устраняются применением непрерывных способов культивирования.

Данные методы характеризуются непрерывным поступлением в ферментатор свежей питательной среды и непрерывным оттоком готовой культуральной жидкости вместе с клетками введенной культуры микроорганизма.

При непрерывном культивировании можно задержать культуру на логарифмической стадии роста (или любой другой), установки могут длительно работать без остановки на дезинфекцию, время производства сокращается, процесс легче автоматизировать.

Различают гомогенно- и гетерогенно-непрерывное культивирование.

Гомогенно-непрерывный способ отличается интенсивным перемешиванием содержимого в ферментаторе, благодаря этому все параметры в любой точке аппарата и в вытекающей из него среде одинаковы.

Гетерогенно-непрерывный способ характеризуется незначительным перемешиванием среды или полным его отсутствием. При этом состав среды в любой точке аппарата различен, однако показатели системы в целом не изменяются во времени.

Гомогенные методы культивирования чаще всего используют для накопления биомассы микроорганизмов, гетерогенные __ для проведения собственно процесса брожения.

Все непрерывные процессы осуществляют в одном аппарате или в батарее, соединенных последовательно между собой ферментаторов.

4 Факторы, влияющие на рост и размножение микроорганизмов

Для того чтобы культура микроорганизмов могла нормально расти, размножаться и осуществлять биосинтез какого-либо вещества, необходимо соблюдать оптимальные параметры окружающей среды. При неблагоприятных условиях изменяются свойства микроорганизмов, подавляется их жизнедеятельность или происходит гибель. Различают три кардинальные точки, которые определяют развитие микроорганизмов:

- минимум __ жизнедеятельность культуры только начинается;

- максимум __ жизнедеятельность уже прекращается;

- оптимум __ жизнедеятельность проявляется с наибольшей интенсивностью.

На рост и развитие микроорганизмов влияют физические, химические и биологические факторы.

Физические __ температура, влажность среды, концентрация питательных веществ.

Температура. Каждая группа микроорганизмов развивается в определенных температурных пределах. По отношению к оптимальной температуре развития все микроорганизмы делят на три группы: психрофилы, мезофилы и термофилы.

Психрофилы __ минимальная температура развития от минус 7 до 0 °С; оптимальная 15-20 °С; максимальная 30-35 °С.

Мезофилы __ минимальная температура их развития 5-10 °С; оптимальная 25-35 °С; максимальная 40-50 °С. К этой группе относится большинство используемых в промышленности микроорганизмов, как культурных, так и вредных.

Термофилы __ минимальная температура развития не менее 30 °С; оптимальная 45-60 °С; максимальная 70-80 °С.

Температуры, превышающие максимальные, приводят к гибели микроорганизмов за счет тепловой коагуляции белков клетки и инактивации ферментов. При температуре 70°С большинство вегетативных форм микроорганизмов гибнет за 1-5 мин.

Температуры ниже минимальных гибель микроорганизмов не вызывают, а только приостанавливают их жизнедеятельность.

Влажность среды. Нормальное функционирование клетки (обмен веществ, рост и размножение) возможно только тогда, когда в ней содержится достаточное количество влаги и сама клетка погружена в водную среду с растворенными в ней питательными веществами.

Бактерии развиваются при минимальной влажности субстрата 25-30 %, грибы и дрожжи __ 10-15 %, а иногда и 6-7 %.

При снижении влажности уменьшается интенсивность биохимических реакций и, следовательно, жизненных процессов. От влажности среды зависит устойчивость микроорганизмов к высоким температурам. В среде с повышенной влажностью гибель их происходит быстрее, чем в воздушной среде.

Концентрация питательных веществ. Влияние этого фактора на жизнедеятельность микроорганизмов связано с явлением осмоса.

Осмос __ перенос веществ через полупроницаемую перегородку (в частности, через цитоплазматическую мембрану клетки). Осуществляется благодаря разнице осмотических давлений, которые создаются растворенными веществами, по обе стороны перегородки. Вода движется со стороны меньшего осмотического давления в сторону большего, растворенные вещества __ наоборот. Этим объясняется проникновение вещества в клетку даже при очень малой его концентрации в среде.

Высокие концентрации любых питательных веществ создают высокое осмотическое давление во внешней среде, которое значительно превышает осмотическое давление внутри клетки. Вода при этом выходит из клетки наружу, в результате чего она обезвоживается, протоплазма отделяется от стенки. Это явление называется плазмолиз.

Если среда сильно разбавлена (имеет низкое осмотическое давление), то вода из среды поступает в клетку, она набухает и такое состояние называется плазмоптисом. В конечном счете, клетка может разорваться.

Плазмолиз и плазмоптис при определенных условиях являются обратимыми процессами.

Для обеспечения нормального поступления питательных веществ в клетку, необходимо поддерживать ее в состоянии тургора, когда осмотическое давление в среде чуть меньше осмотического давления внутри клетки. В этом случае вода, проникая в клетку, создает определенное напряжение клеточной оболочки, и протоплазма оказывается прижатой к внутренней стенке.

Содержимое клетки по осмотическому давлению эквивалентно 10-20 %-му раствору сахарозы.

Минимальной для активного обмена веществ является приблизительно 0,5 %-ная концентрация сахара или соли в воде. Некоторые микроорганизмы могут сохранять свою жизнедеятельность в концентрированных растворах (с высоким осмотическим давлением). Такие микроорганизмы называются осмофильными.

К химическим факторам, которые влияют на жизнедеятельность микроорганизмов, относятся: рН среды, окислительно-восстановительный потенциал (гН2) и присутствие в среде токсичных веществ.

рН среды. Выражает степень кислотности или щелочности среды. Колебания рН могут вызвать изменение активности ферментов, обмена веществ. Например, в кислой среде дрожжи образуют этиловый спирт, в щелочной - глицерин.

Каждая группа микроорганизмов существует в определенном интервале рН. Дрожжи и плесневые грибы хорошо развиваются в слабокислой среде (рН 4-6), бактерии __ в нейтральной или слабощелочной (рН 6,5-7,5).

Окислительно-восстановительные условия среды. Большое значение для жизнедеятельности микроорганизмов имеет кислород. Для некоторых микроорганизмов он жизненно необходим, для других является ядом. Окислительно-восстановительный потенциал выражается редокс-потенциалом (гН2) ___ отрицательным логарифмом концентрации молекулярного водорода, который характеризует степень окисленности (аэробности) или восстановленности (анаэробности) среды. гН2 лежит в пределах от 0 до 41. В водном растворе, насыщенном кислородом, гН2 равен 41, а в условиях насыщения водородом гН2 равен 0.

По отношению к редокс-потенциалу микроорганизмы подразделяют на:

облигатные аэробы - живут только в присутствии кислорода и получают энергию за счет дыхания;

облигатные анаэробы - микроорганизмы, которые растут в среде, лишенной кислорода, так как он для них токсичен. Получают энергию за счет брожения (окислительно-восстановительных процессов, которые протекают без участия кислорода воздуха);

факультативные анаэробы и аэробы могут жить как при доступе, так и в отсутствие кислорода, переходя с дыхания на брожение.

Для облигатных аэробов гН2 находится в пределах 14-30, для облигатных анаэробов гН2 __ 0-14, для факультативных анаэробов гН2 от 0 до 20.

Действие химических веществ. Многие вещества замедляют и подавляют действие микроорганизмов. К ним относятся: спирты, фенолы, альдегиды (особенно формальдегид), нитраты, пестициды, кислоты (бензойная, сернистая, сорбиновая, борная, фтористоводородная), щелочи, соли тяжелых металлов (ртути, меди, серебра), окислители (KМnО4, J, C1, Н2О2), газы (сернистый, диоксид углерода). Эффективность действия их на микроорганизмы зависит от химической природы, применяемой концентрации, условий среды (рН, температуры) и вида микроорганизмов. Как правило, высокие дозы этих веществ оказывают летальное действие, а малые дозы в некоторых случаях могут даже являться стимуляторами роста микроорганизмов.

Биологические факторы __ сводятся к взаимоотношению между организмами, соприкасающимися в процессе своей жизнедеятельности. Основные типы взаимоотношений: симбиоз, метабиоз, антагонизм, паразитизм.

Симбиоз __ два или более вида организма совместно развиваются лучше, чем по отдельности (например, бобовые растения и клубеньковые бактерии; молочнокислые бактерии и дрожжи в производстве кваса).

Метабиоз __ жизнедеятельность одного организма способствует развитию другого (например, продукты обмена одного микроорганизма являются источником питания для другого).

Антагонизм __ один вид организма угнетает или вызывает гибель другого за счет быстрого размножения или выделения в среду метаболитов (например, антибиотиков, микотоксинов).

Паразитизм __ один организм живет за счет другого.

5 Обмен веществ микроорганизмов

Для поддержания своей жизнедеятельности, осуществления размножения и роста любой организм нуждается в энергии. Эту энергию клетки микроорганизмов получают в результате обмена веществ (метаболизма). Обмен веществ __ это совокупность химических процессов, катализируемых ферментами клетки.

Метаболизм складывается из двух одновременно и последовательно протекающих процессов: катаболизма (диссимиляции) и анаболизма (ассимиляции).

Катаболизм __ ферментативное расщепление сложных веществ (углеводов, углеводородов, липидов, белков). Включает три стадии.

На первой стадии высокомолекулярные соединения расщепляются на основные составляющие: углеводы __ на гексозы и пентозы; белки __ на аминокислоты; липиды __ на жирные кислоты и глицерин. В отличие от других микроорганизмов для дрожжей первая стадия подготовки высокомолекулярных веществ протекает вне клетки и без ее участия, так как они не содержат внеклеточные ферменты, катализирующие распад сложных органических компонентов среды.

На второй стадии продукты первой стадии превращаются в более простые молекулы (ацетил-КоА, сукцинат, фумарат и ряд других).

Третья стадия характеризуется окислением образовавшихся на предыдущем этапе продуктов до СО2 и воды и выделением энергии, которая запасается в виде АТФ.

Анаболизм __ ферментативный синтез сложных соединений. Исходными веществами или строительными блоками для синтетических процессов служат соединения, образовавшиеся на стадии катаболизма. Кроме того, реакции синтеза сопровождаются затратами энергии, которая также высвободилась на предыдущей стадии.

В процессе обмена веществ образуются различные промежуточные продукты, называемые метаболитами.

Существует много путей метаболизма, основными из которых являются гликолиз, или спиртовое брожение, гексомонофосфатный путь, цикл трикарбоновых кислот, глюкогенез.

6 Транспорт веществ в клетку

Для того чтобы экзогенный субстрат мог быть использован клеткой, он должен пройти через ее пограничные слои. Клеточная стенка не служит существенной преградой для небольших молекул и ионов, но она задерживает макромолекулы. Пограничным слоем, который отвечает за транспорт питательных веществ внутрь клетки, является цитоплазматическая мембрана.

Цитоплазматическая мембрана представляет собой трехслойную структуру, состоящую из двойного слоя липидов, слоя белков и углеводов.

Липиды представлены моно-, ди- и триглицеридами, глицерофосфатидами, стеринами.

Природа белков известна хуже, но, вероятно, в их состав входят ферменты, принимающие участие в усвоении сахаров и аминокислот.

Основным компонентом углеводов являются мукополисахариды, которые связаны либо с липидами, либо с белками.

Наличие у липидов двух частей __ гидрофобной (углеводородные радикалы, неполярные хвосты) и гидрофильной (остатки фосфорной кислоты, полярные головки), определяет их способность образовывать мембраны. Если липиды находятся в воде и концентрация их невелика, то они в виде капелек (мицелл) образуют мономолекулярный слой, в котором гидрофобные участки молекул обращены наружу, к воздуху, а гидрофильные __ в воду. Если же концентрация липидов высокая, то мицеллы образуют двойной плоский слой, где гидрофобные участки расположены друг против друга (хвост к хвосту). Липиды взаимодействуют с белками и углеводами полярными группами.

В течение длительного времени господствовала "бутербродная" модель строения мембран, в соответствии с которой наружные слои представлены белками, а внутренний __ двойным липидным слоем.

Позже стали допускать, что наружный слой состоит из мукополисахаридов.

В настоящее время придерживаются так называемой "мозаичной" модели строения мембран (рис.7). В двойной слой липидов встроены интегральные белки, которые "плавают" в этом слое, будучи погружены в него частично, или же пронизывают его насквозь. Другие белки (периферические) прикреплены к поверхности мембраны.

Мембрану следует представлять себе как очень мягкое, пластичное, почти жидкое образование, что определяется жирнокислотным составом углеводородных цепей липидов. Чем больше в составе фосфолипидов мембран ненасыщенных жирных кислот, тем выше скорость поступления веществ в клетку.

Как уже было сказано выше, основная функция мембран __ обеспечение поступления веществ из среды в клетку и из клетки наружу. Различают следующие виды транспорта веществ через мембрану (рис.8).

Простая диффузия__ растворенное вещество из области большей концентрации поступает в область меньшей (т.е. по градиенту концентраций) до выравнивания концентраций по обе стороны перегородки. Скорость перемещения невелика, затраты энергии отсутствуют. Проникновение неспецифическое, зависит от величины молекул, степени их липофильности (степени сродства к липидам).

Простой диффузией в клетку проникают, по-видимому, яды, ингибиторы и другие чужеродные клетке вещества.

Облегченная диффузия (пассивный транспорт) __ вещество проникает по градиенту концентраций (из более концентрированной области в менее концентрированную), но с большей скоростью, чем при простой диффузии, затрат энергии нет. Перенос идет с помощью транспортных белков-переносчиков __ пермеаз. Они обладают высокой избирательностью. Переносят гидрофильные вещества (сахара, аминокислоты, ионы К, Са, Nа).

Простой и облегченной диффузией можно обеспечить только транспорт, но не накопление веществ в клетке. Для осуществления последнего используется активный транспорт.

Активный транспорт __ поступление вещества идет против градиента концентраций (т.е. из области меньших концентраций в большую) с затратами энергии и при участии пермеаз.

Транспорт веществ с участием переносчиков зависит от присутствия других веществ, которые также переносятся через мембрану.

Различают следующие типы активного транспорта (рис.9):

юнипорт (унипорт) __ молекулы транспортируемых веществ или ионы металлов переносятся через мембрану независимо от наличия и переноса других соединений;

симпорт __ перенос идет одновременно и в одном направлении с другими соединениями;

антипорт __ транспорт обусловлен одновременным и противоположно направленным переносом другого соединения.

7 Производственная инфекция и способы дезинфекции

Инфекция __ попадание в полуфабрикаты и готовую продукцию посторонних микроорганизмов. Инфицирование приводит к порче продукта или к снижению его выхода.

Источники инфекции могут быть как внешние (воздух, вода, сырье, тара), так и внутризаводские (воздух производственных помещений, технологическое оборудование, трубопроводы, арматура, руки, одежда и обувь обслуживающего персонала).

Для соблюдения правильного санитарно-гигиенического режима на пищевых предприятиях эффективным способом уничтожения и подавления развития посторонних микроорганизмов является дезинфекция.

Дезинфекция (обеззараживание) __ уничтожение вредителей данного производства, которые вызывают порчу сырья, полуфабрикатов и готовой продукции, а также патогенных микроорганизмов, возбудителей пищевых инфекций и отравлений.

На каждом предприятии проводят профилактические меры борьбы: своевременно удаляют отходы производства, соблюдают чистоту во всех отделениях предприятия, внутри оборудования, трубопроводов. Наряду с профилактическими применяют и активные меры борьбы с инфекцией, которые по характеру действующего средства делятся на физические и химические.

К физическим методам обеззараживания относятся различные способы термической обработки, ультрафиолетовое облучение, ультразвук, фильтрация.

Виды термической обработки: пастеризация __ обработка продуктов при температуре до 100 0С; стерилизация __ обработка при температуре 1000С и выше (кипячение, автоклавирование, тиндализация __ дробная стерилизация, пропаривание).

Фильтрации (холодной стерилизации) чаще всего подвергают растворы, содержащие вещества, которые изменяются под действием высоких температур. В качестве фильтрующих материалов используют обеспложивающий фильтр-картон, мембраны.

К химическим средствам обеззараживания относится большое количество различных моющих и дезинфицирующих веществ. Деление это условное, так как некоторые моющие вещества обладают дезинфицирующим действием и, наоборот. В случае, если вещество только подавляет рост бактерий или грибов (дрожжей), а после его удаления при благоприятных условиях рост микрофлоры вновь возобновляется, то говорят, соответственно, о бактериостатическом или фунгистатическом действии. Если препарат вызывает гибель бактерий или грибов, то он обладает соответственно бактерицидным или фунгицидным действием.

В качестве таких веществ применяют кальцинированную соду (Na2CO3), каустическую соду (NaOH), хлорную известь, формалин (водный раствор формальдегида), антиформин (смесь растворов хлорной извести, гидроксида натрия и карбоната натрия), диоксид серы (SO2), сернистую кислоту (H2SO3), озон, перманганат калия, сульфанол, септабик и др.

Дезинфекция оборудования заключается в механическом удалении остатков среды и микроорганизмов, термической и химической его обработке.

Контрольные вопросы

1 Дайте краткую характеристику микроорганизмам, используемым в бродильных производствах.

2 Опишите стадии развития микроорганизмов.

3 Дайте характеристику способам культивирования.

4 Нарисуйте кривую роста микроорганизмов при периодическом способе культивирования и охарактеризуйте основные стадии развития.

5 Поясните различия между терминами размножение и рост микроорганизмов.

6 Охарактеризуйте влияние рН, окислительно-восстановительного потенциала, концентрации питательной среды, температуры, присутствия других микроорганизмов на процесс жизнедеятельности клеток культуры.

7 Объясните сущность обмена веществ у микроорганизмов.

8 Сформулируйте роль биологических мембран в жизнедеятельности микроорганизмов.

9 Нарисуйте схему строения биомембран согласно современным представлениям о ней.

10 Объясните сущность активного, пассивного транспорта и простой диффузии веществ в клетку.

11 Укажите источники производственной инфекции на предприятиях бродильной промышленности.